Standard „Determinarea proteinei în urină prin metoda expresă”. Proteine ​​în urină, analize de laborator

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov se referă la metode semi-cantitative pentru determinarea proteinei totale în urină. Metoda se bazează pe testul inel Heller, care constă în faptul că la limita acidului azotic și urinei, în prezența proteinei, se coagulează și apare un inel alb.

Reactivi

soluție de acid azotic 50% sau reactiv Larionova.
Prepararea reactivului Larionova: se prepară o soluție saturată de clorură de sodiu (20 - 30 g de sare se dizolvă în 100 ml apă la încălzire, se lasă să stea până se răcește). Supernatantul este drenat, filtrat. La 99 ml de filtrat se adaugă 1 ml de acid azotic concentrat. În loc de acid azotic se pot adăuga 2 ml de acid clorhidric concentrat.

Progresul definirii

Se toarnă 1 - 2 ml de acid azotic (sau reactiv larionic) în eprubetă, acidul se lasă să se scurgă de pe pereții eprubetei (5 - 8 minute), în caz contrar, atunci când urina proteică este stratificată, se formează turbiditate din cauza amestecării acidului azotic de pe pereții eprubetei cu urina, ceea ce împiedică formarea unui inel distinct. Prin urmare, o serie de eprubete cu acid trebuie pregătită în prealabil. Folosind o pipetă, așezați cu grijă aceeași cantitate de apă filtrată peste peretele eprubetei. urină limpede având grijă să nu scuture lichidul din eprubetă. Apariția unui inel alb subțire la interfața dintre cele două fluide între minutele 2 și 3 indică prezența proteinei la o concentrație de aproximativ 0,033 g/L. Timpul de stratificare este socotit ca un sfert de minut.

Dacă inelul apare mai devreme de 2 minute după stratificare, urina trebuie diluată cu apă și trebuie efectuată stratificarea repetată a urinei deja diluate. Gradul de diluare a urinei este selectat în funcție de tipul de inel, adică de lățimea, compactitatea și timpul de apariție. Cu un inel filiform apărut înainte de 2 minute, urina se diluează de 2 ori, cu una largă - de 4 ori, cu una compactă - de 8 ori etc. Diluarea urinei se face într-un tub centrifugă de măsurare, turnând urina până la semnul de 1 ml și adăugând apă la semn, de câte ori se face diluarea. Conținutul eprubetei este bine amestecat cu o pipetă Pasteur cu un balon. Dacă apare turbiditate în timpul diluării urinei, atunci amestecul trebuie filtrat din nou și numai filtratul transparent trebuie să fie stratificat pe acid azotic. Concentrația de proteine ​​este apoi calculată prin înmulțirea cu 0,033 cu raportul de diluție și exprimată în grame pe litru (g/l). O astfel de diluare a urinei este selectată astfel încât, atunci când este stratificată pe acid azotic, inelul să apară în al 2-lea - al 3-lea minut.

În cazul în care se formează un inel între 1 și 4 minute cu urina nediluată sau diluată, se poate folosi corecția Ehrlich-Althausen pentru a nu dilua urina în continuare (acest lucru economisește timp). Autorii au propus să se determine timpul de apariție a inelului filamentos și să se corecteze calculul pentru timp. În acest caz, cantitatea de proteină se calculează prin înmulțirea a 0,033 g/l cu gradul de diluție și prin corecție.

Când se formează un inel înainte de expirarea a 1 minut, trebuie făcută o diluție fracționată, și anume de 1,5 ori (două părți de urină și 1 parte de apă). Această diluție este luată în considerare și la calcularea cantității de proteine ​​​​din urină.

Un exemplu de determinare a proteinei totale în urină prin metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Când stratificați urina pe reactiv, se formează imediat un inel larg. Urina este diluată de 4 ori (1 parte de urină + 3 părți de apă), stratificată; se obţine imediat un inel filiform. Este necesar să se dilueze diluția existentă de încă 2 ori; la stratificarea acestei diluții, se formează un inel după 1,5 minute. Nu mai poți reproduce.

Calculul proteinelor: urina a fost diluată de 4 și 2 ori, prin urmare, de 8 ori. Cantitatea de proteine ​​este de 0,033*8*1 1/4 = 0,33 g/l

Dezavantajele metodei Brandberg-Roberts-Stolnikov:

• subiectivitate,
• laboriozitate,
• scăderea preciziei determinării concentrației de proteine ​​pe măsură ce urina este diluată.

Vezi si:

Literatură:

• Manual „Metode de cercetare de laborator în clinică”, ed. prof. V. V. Menşikov. - Moscova, „Medicina”, 1987
• L. V. Kozlovskaya, A. Yu. Nikolaev. Tutorial conform metodelor de cercetare clinică de laborator. Moscova, Medicină, 1985
• A. Ya. Althausen, „Diagnoza de laborator clinic” - Moscova, Medgiz, 1959
• A. Ya. Lyubina, L. P. Ilyicheva și coautorii, „Cercetarea de laborator clinic”, Moscova, „Medicina”, 1984

R-you 50% soluție de azot la-ți sau p-larionic. Cursul de determinare: se pun un număr de eprubete într-un trepied și se toarnă 1 ml de soluție de acid azotic, se adaugă 1 ml de urină, se adaugă reactivul și se notează ora, când apare un inel, înregistrăm momentul apariției inelului. Dacă inelul este larg, diluați urina.

4. Determinarea concentrației proteice în urină cu acid sulfosalicilic 3%.

Soluții: 3% sc, clorură de sodiu 9%, pp albumină 10%.Proces de determinare: 1,25 ml de urină limpede se pun în două tuburi centrifuge măsurate „O” - experiență și „K” - control. La cea experimentală se adaugă 3,75 ml dintr-o soluție 3% de acid sulfosalicilic, iar la martor se adaugă 3,75 ml dintr-o soluție 0,9% de clorură de sodiu. Se lasă timp de 5 minute, apoi fotometrie pe FEC la o lungime de undă de 590 - 650 nm (filtru de lumină portocalie sau roșie) într-o cuvă cu o grosime a stratului de 5 mm experiment împotriva controlului. Calculul se efectuează conform graficului sau tabelului de calibrare. Principiul metodei se bazează pe faptul că proteina cu acid sulfosalicilic dă turbiditate, a cărei intensitate este direct proporțională cu concentrația proteinei.

5. detectarea glucozei în urină, testul Gaines-Akimov. Principiu: Glucoza, atunci când este încălzită într-un mediu alcalin, reduce dihidroxidul de cupru ( Culoarea galbena) la monohidroxid de cupru (portocaliu-rosu). Prepararea reactivului: 1) 13,3 g chimic. sulfat de cupru cristalin pur (CuSO4 . 5 H2O) soluţie. în 400 ml apă. 2) 50 g de sodă caustică se dizolvă în 400 ml apă. 3) 15 g de glicerină pură se diluează în 200 ml apă. Se amestecă prima și a doua soluție și se adaugă imediat pe a treia. Rafturi de reactivi. Progresul definirii: 1 picătură de urină și 9 picături de reactiv se adaugă în eprubetă și se fierb într-o baie de apă timp de 1-2 minute. Test pozitiv: culoarea galbenă sau portocalie a lichidului sau precipitatului.

6. Definiție calitativă glucoză în urină prin metoda glucozooxidazei. Principiul metodei: glucoza se oxideaza in prezenta glucozooxidazei, conform reactiei: Glucoza + O 2 cu gliconolant + H 2 O 2. Peroxidul H format sub actiunea peroxidazei oxideaza substratul cu formarea unui produs colorat.

Se toarnă și se incubează timp de 15 minute la 37 0 C. Uită-te la cuva CPK, de 5 mm.

Apoi, calculele se fac după formula: С op = Ext op . Cst/ Ect st.

7. Detectarea corpilor cetonici în urină prin testul Lestrade. Pe lama de sticlă se aplică (în vârful bisturiului) o pulbere sau o tabletă de soluție Lestrade, iar pe aceasta se aplică 2-3 picături de urină. În prezența corpurilor cetonice, va apărea o culoare roz până la violet. Eșantionul este evaluat pe un fundal alb.

8. Detectarea pigmentului de sânge în urină printr-un test cu o soluție alcoolică de amidopirină 5%.

1.5% soluție alcoolică amidopirină (0,5 g amidopirină se dizolvă în 10 ml alcool 96%) 2,3% soluție de peroxid hidrogen 1,5 g hidropirită se dizolvă în 50 ml apă) Desfăşurarea procedurii: se toarnă 2-3 ml extract de eter acetic sau urină agitată nefiltrată într-o eprubetă.Se adaugă 8-10 picături de soluţie de amidopirină 5% şi 8-10 picături de soluţie de peroxid de hidrogen 3%; rezultatul nu este considerat pozitiv în prezenţa 2-3 minute. lasa colorarea.

Detectarea urobilinei în urină cu un test Neubauer.

Se bazează pe reacția de culoare a urobilinogenului cu reactivul Erlich, care constă din 2 g de paradimetilaminobenaldehidă și 100 ml soluție de acid clorhidric (200 g.l). robilinogen. În mod normal, culoarea apare mai târziu sau este complet absentă. Când urina este în picioare, urobilinogenul se poate transforma în proba negativă.

Detectarea bilirubinei în urină cu un test cu colofoniu.

Soluție alcoolică de iod (10 g.l): 1 g de iod cristalin se dizolvă într-un cilindru cu o capacitate de 100 ml în 20-30 ml de 96 g de alcool rectificat și apoi se completează cu alcool până la semn Cursul de determinare pe soluția de alcool de iod. , precum și la înmuierea în pigmentul de sânge din urină, testul se dovedește a fi pozitiv).La o persoană sănătoasă, acest test este negativ.

Examinarea urinei prin chimie uscată (monopoliteste).

Principiu. Metoda se bazează pe efectul exercitat de proteină asupra culorii indicatorului din soluția tampon, în urma căruia colorantul își schimbă culoarea de la galben la albastru.

Când se testează prezența proteinelor în urină și se determină pH-ul folosind hârtie indicator, se recomandă să se respecte următoarele recomandări:

1. Colectați urina într-un vas bine spălat.
2. Utilizați urină proaspăt colectată, fără conservanți.
3. Închideți cu grijă carcasa după ce o scoateți din ea. suma necesară benzi de testare de hârtie.
4. Nu prindeți zonele indicatoare cu degetele.
5. Utilizați numai în termenul de expirare menționat pe etichetă.
6. Respectați regulile de depozitare a hârtiei indicatoare.
7. Evaluați rezultatele în conformitate cu instrucțiunile disponibile în instrucțiuni.

Efectuarea unui test de urină pe un analizor chimic de urină uscată.

Progresul definirii. O fâșie de hârtie indicatoare este scoasă din carcasă și scufundată în urina de testare, astfel încât ambele zone indicator să fie umezite simultan. După 2-3 secunde, banda se așează pe o placă de sticlă albă. Efectuați imediat o evaluare a pH-ului folosind scala de culori imprimată pe cutia de creion. Valoarea pH-ului pe scara de culori corespunde la 6,0 (sau mai puțin); 7,0; 8,0; 9,0.

Prepararea urinei, prepararea preparatelor din sedimentul urinar prin examinare microscopică în mod aproximativ.

Examinarea microscopică a sedimentului urinar se efectuează printr-o metodă aproximativă la analiza generalași numărarea cantitativă a elementelor formate pentru o evaluare mai precisă a gradului de leucociturie și hematurie.

Reguli pentru prepararea sedimentului urinar pentru microscopie.

Prima porțiune de dimineață de urină este supusă examinării microscopice.

După amestecare prealabilă, se prelevează 10 ml de urină, se centrifughează timp de 10 minute la 1500 rpm.

Apoi tubul de centrifugă cu urină este răsturnat cu o mișcare ascuțită, supernatantul este turnat rapid într-un borcan gol.

Se amestecă, se așează o picătură pe o lamă de sticlă și se acoperă cu grijă cu o lamă.

Dacă precipitatul este format din mai multe straturi, atunci pregătiți preparatul, apoi centrifugeți din nou și pregătiți preparatele din fiecare strat separat.

În absența unui sediment vizibil pentru ochi, o picătură de urină este aplicată pe o lamă de sticlă și la microscop.

La început, materialul este examinat la mărire redusă (ocular 7-10, obiectiv 8), în timp ce condensatorul este coborât, diafragma este ușor îngustată, apoi pregătirea este studiată în detaliu la mărire mare(ocular 10,7; obiectiv 40).

14.Studiul cantitativ al sedimentului urinar conform lui Nechiporenko.

Metoda este utilizată pentru procesele inflamatorii lente latente (pielonefrită, glomerulonefrită), piurie latentă. Să studieze procesul patologic în dinamică. Pentru a evalua eficacitatea tratamentului. Avantajele metodei: simplu din punct de vedere tehnic, nu necesită o cantitate mare de urină și este de lungă durată. depozitarea acestuia, este utilizată în practica ambulatorie. Obligatoriu conditii: urină de dimineață, porție medie, soluție acidă (în alcalin poate exista o defalcare parțială a elementelor celulare). 1. Se amestecă urina 2. Se pun 10 ml de urină într-un tub de centrifugă de măsurare și se centrifughează timp de 10 minute la 1500 rpm. 3. După centrif. supt Pipetați partea superioară a lichidului, lăsați. exact 1 ml de sediment. 4. Precipitatul este bine amestecat și camera Goryaev este umplută. 5. După 3-5 minute de la umplere, încep să numere elementele modelate. 6. Numărarea leucocitelor, Er, cilindrii cu un ocular 15 obiectiv 8 când este coborât. condensator, în 100 pătrate cu cameră mare. Celulele albe, Er sunt numărate separat, cilindrii (numărând cel puțin 4 camere Goryaev) sunt excretați. arith. X \u003d A x 0,25x 10 6 / l. Normă: lac. 2-4x 10 6 /l, Er până la 1 x 10 6 /l, cilindri până la 0,02 x 10 6 /l (una pentru 4 camere). La copii: leuk. până la 2-4x 10 6 /l, Er până la 0,75 x 10 6 /l, butelii până la 0,02 x 10 6 /l.

15. Analiza urinei după Zimnitsky

Acest test determină capacitatea rinichilor de a se concentra. și urina diluată. Esența probei în definiţie dinamică densitate relativași cantitatea de urină în porții de trei ore în timpul zilei. Efectuarea testului: după golire Vezica urinara la ora 6 dimineața în toaletă, pacientul colectează urina la fiecare trei ore în borcane separate în timpul zilei. Doar 8 portii. Progresul cercetării: 1. Livrare. Urina este aranjată pe oră și în fiecare porție se determină cantitatea și densitatea relativă. 2. Comparați cantitatea zilnică de urină și cantitatea de lichid băut pentru a determina. % din excreția sa. 3. Calculați diureza de zi și de noapte, rezumați, obțineți diureza zilnică. 4. Setați intervalul de fluctuație al cantității și al relativului. densitatea urinei pe zi, adică care este diferența dintre cea mai mică porțiune și cea mai mare. Spectacol. teste de sănătate. persoane: 1. Diureză zilnică 800-1500 ml. 2. Diureza de zi predomină semnificativ peste noapte. 3. Sunt semnificative fluctuațiile volumului de urină în porții individuale (de la 50 la 400 ml). 4. Fluctuațiile p de la 1,003 la 1,028, ar trebui să fie mai mari de 0,008. Cu func. insuficiență renală: hipostenurie, hipoizostenurie, izostenurie, hiperstenirie, oligurie, anurie, nicturie.

16. Descrierea proprietăților generale ale fecalelor.

În mod normal, fecalele constau din produse de secreție și excreție a tractului digestiv, reziduuri de alimente nedigerate sau parțial digerate și flora microbiană. Cantitatea de fecale este de 100-150 g. Consistența este densă. Forma este cilindrică. Mirosul este normal fecal. Culoarea maro. R-ția este neutră, ușor alcalină sau ușor acidă (pH 6,5-7,0-7,5). Mucusul este absent. Sângele este absent. Resturile de alimente nedigerate sunt absente.

Proteine ​​în urină: metode de determinare

Proteinurie patologică este unul dintre cele mai importante și constante semne ale bolilor rinichilor și ale tractului urinar. Determinarea concentrației de proteine ​​în urină este un element obligatoriu și important al studiului urinei. Detectarea și cuantificarea proteinuriei este importantă nu numai în diagnosticul multor boli renale primare și secundare, dar evaluarea modificărilor severității proteinuriei în dinamică oferă informații despre cursul procesului patologic și eficacitatea tratamentului. Detectarea proteinelor în urină, chiar și în urme, ar trebui să alerteze pentru posibile boli ale rinichilor sau ale tractului urinar și necesită reanalizare. De remarcat în mod deosebit este lipsa de sens a studiului urinei și, în special, determinarea proteinei din urină fără a respecta toate regulile de colectare.

Toate metodele pentru determinarea proteinelor în urină pot fi împărțite în:

calitate,

semi-cantitative,

Cantitativ.

Metode calitative

Toate teste calitative pentru proteinele din urină bazată pe capacitatea proteinelor de a se denatura sub influența diverșilor factori fizici și chimici. În prezența proteinei în proba de urină de testat, apare fie turbiditate, fie floculare.

Condiții pentru determinarea proteinelor în urină pe baza reacției de coagulare:

Urina trebuie să fie acidă. Urina alcalina se aciduleaza cu cateva (2 - 3) picaturi de acid acetic (5 - 10%).

Urina trebuie să fie limpede. Turbiditatea este îndepărtată printr-un filtru de hârtie. Dacă ceața persistă, se adaugă talc sau magnezie arsă (aproximativ 1 linguriță la 100 ml de urină), se agită și se filtrează.

O probă calitativă trebuie efectuată în două eprubete, una dintre ele fiind una de control.

Căutați turbiditatea ar trebui să fie pe un fundal negru în lumină transmisă.

Metodele calitative pentru determinarea proteinelor în urină includ:

Testul inelului Heller,

proba cu 15 - 20% acid sulfosalicilic,

test de fierbere și altele.

Numeroase studii arată că niciunul dintre un numar mare metodele cunoscute pentru determinarea calitativă a proteinei în urină nu permit obținerea de rezultate fiabile și reproductibile. În ciuda acestui fapt, în majoritatea DLT-urilor din Rusia, aceste metode sunt utilizate pe scară largă ca screening - în urină cu o reacție calitativă pozitivă, se efectuează o determinare cantitativă suplimentară a proteinei. Dintre reacțiile calitative, testul Heller și testul acidului sulfosalicilic sunt mai frecvent utilizate, dar testul acidului sulfosalicilic este în general considerat cel mai potrivit pentru depistarea proteinuriei patologice. În prezent, testul de fierbere nu este utilizat practic datorită complexității și duratei sale.

Metode semi-cantitative

LA metode semi-cantitative raporta:

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov,

determinarea proteinelor în urină cu ajutorul benzilor de test de diagnostic.

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov se bazează pe testul inel Geller, prin urmare, cu această metodă se observă aceleași erori ca și la testul Geller.

În prezent, benzile de diagnosticare sunt din ce în ce mai folosite pentru a determina proteina din urină. Colorantul albastru de bromofenol în tampon citrat este cel mai adesea folosit ca indicator pentru determinarea semicantitativă a proteinei în urină pe o bandă. Conținutul de proteine ​​din urină este judecat după intensitatea culorii albastru-verde care se dezvoltă după contactul zonei de reacție cu urina. Rezultatul este evaluat vizual sau folosind analizoare de urină. În ciuda popularității mari și a avantajelor evidente ale metodelor de chimie uscată (simplitate, viteza de analiză), aceste metode de analiză a urinei în general și de determinare a proteinelor în special nu sunt lipsite de deficiențe grave. Una dintre ele, care duce la o distorsiune a informațiilor de diagnostic, este sensibilitatea mai mare a indicatorului albastrului de bromofenol la albumină în comparație cu alte proteine. În acest sens, benzile de testare sunt adaptate în principal pentru depistarea proteinuriei glomerulare selective, când aproape toată proteina urinară este reprezentată de albumină. Odată cu progresia modificărilor și trecerea proteinuriei glomerulare selective la neselectivă (apariția globulinelor în urină), rezultatele determinării proteinelor sunt subestimate în comparație cu valorile adevărate. Acest fapt face imposibil de utilizat aceasta metoda determinarea proteinei în urină pentru a evalua starea rinichilor (filtru glomerular) în dinamică. În cazul proteinuriei tubulare, rezultatele determinării proteinelor sunt, de asemenea, subestimate. Testarea proteinelor cu benzi de testare nu este un indicator de încredere al nivelurilor scăzute de proteinurie (majoritatea benzilor de testare disponibile în prezent nu sunt capabile să detecteze proteinele în urină la concentrații mai mici de 0,15 g/L). Rezultatele negative ale determinării proteinelor pe benzi nu exclud prezența globulinelor, hemoglobinei, uromucoidelor, proteinei Bence-Jones și a altor paraproteine ​​în urină.

Fulgi de mucus cu un conținut ridicat de glicoproteine ​​(de exemplu, în procesele inflamatorii în tractului urinar, piurie, bacteriurie) se pot instala pe zona indicatoare a benzii și pot duce la rezultate fals pozitive. Rezultatele fals pozitive pot fi, de asemenea, asociate cu concentrații mari uree. Iluminarea slabă și percepția slabă a culorilor pot cauza rezultate inexacte.

În acest sens, utilizarea benzilor de diagnostic ar trebui să se limiteze la procedurile de screening, iar rezultatele obținute cu ajutorul lor ar trebui considerate doar orientative.

Metode cantitative

corect determinarea cantitativă a proteinei în urină în unele cazuri se dovedește a fi o sarcină dificilă. Dificultățile soluționării sale sunt determinate de următorul număr de factori:

prezența în urină a multor compuși care pot interfera cu cursul reacțiilor chimice;

fluctuații semnificative ale conținutului și compoziției proteinelor urinare cu diverse boli, ceea ce face dificilă alegerea unui material de calibrare adecvat.

În laboratoarele clinice se folosesc cu precădere așa-numitele metode „de rutină” pentru determinarea proteinelor în urină, dar nu întotdeauna oferă rezultate satisfăcătoare.

Din punctul de vedere al unui analist care lucrează într-un laborator, o metodă concepută pentru a cuantifica proteinele din urină ar trebui să îndeplinească următoarele cerințe:

au o relație liniară între absorbția complexului format în timpul reacției chimice și conținutul de proteine ​​din probă într-o gamă largă de concentrații, ceea ce va evita operațiuni suplimentare la pregătirea probei pentru cercetare;

ar trebui să fie simplu, nu necesită calificare înaltă a interpretului, să fie efectuat cu un număr mic de operații;

au sensibilitate ridicată, fiabilitate analitică atunci când se utilizează volume mici de material de testat;

să fie rezistent la diverși factori (fluctuații în compoziția probei, prezența medicamentelor etc.);

au un cost acceptabil;

să fie ușor adaptabil la autoanalizatoare;

rezultatul determinării nu trebuie să depindă de compoziția proteică a probei de urină studiată.

Niciuna dintre metodele cunoscute în prezent pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină nu poate pretinde pe deplin că este „standardul de aur”.

Metodele cantitative pentru determinarea proteinelor în urină pot fi împărțite în turbidimetrice și colorimetrice.

Metode turbidimetrice

Metodele turbidimetrice includ:

determinarea proteinei cu acid sulfosalicilic (SSK),

determinarea proteinei cu acid tricloroacetic (TCA),

determinarea proteinei cu clorură de benzetoniu.

Metodele turbidimetrice se bazează pe scăderea solubilității proteinelor urinare datorită formării unei suspensii de particule în suspensie sub influența agenților de precipitare. Conținutul de proteine ​​din proba de testat se apreciază fie după intensitatea împrăștierii luminii, determinată de numărul de particule care împrăștie lumina (metoda nefelometrică de analiză), fie prin slăbirea fluxului luminos de către suspensia rezultată (metoda de analiză turbidimetrică).

Cantitatea de împrăștiere a luminii în metodele de precipitare pentru detectarea proteinelor în urină depinde de mulți factori: viteza de amestecare a reactivilor, temperatura amestecului de reacție, valoarea pH-ului mediului, prezența compușilor străini, metode fotometrice. Observarea atentă a condițiilor de reacție contribuie la formarea unei suspensii stabile cu o dimensiune constantă a particulelor și la obținerea unor rezultate relativ reproductibile.

Unele medicamente interferează cu rezultatele metodelor turbidimetrice pentru determinarea proteinelor în urină, ducând la așa-numitele rezultate „fals pozitive” sau „fals negative”. Acestea includ unele antibiotice (benzilpenicilină, cloxacilină etc.), substanțe radioopace care conțin iod, preparate sulfanilamide.

Metodele turbidimetrice sunt greu de standardizat și conduc adesea la rezultate eronate, dar, în ciuda acestui fapt, ele sunt utilizate în prezent pe scară largă în laboratoare datorită costului scăzut și disponibilității reactivilor. Cea mai utilizată metodă în Rusia este determinarea proteinei cu acid sulfosalicilic.

Metode colorimetrice

Cele mai sensibile și precise sunt metodele colorimetrice pentru determinarea proteinelor totale din urină, bazate pe reacții de culoare specifice ale proteinelor.

Acestea includ:

reacție la biuret,

metoda lowry,

metode bazate pe capacitatea diverșilor coloranți de a forma complexe cu proteine:

Ponceau S (Ponceau S),

Coomassie Brilliant Blue (Coomassie Brilliant Blue)

pyrogallol red (Pyrogallol Red).

Din punctul de vedere al interpretului, în munca zilnică a laboratorului cu un flux mare de cercetare, metoda biuretului este incomodă din cauza numărului mare de operații. În același timp, metoda se caracterizează printr-o fiabilitate analitică ridicată, permite determinarea proteinelor într-o gamă largă de concentrații și detectarea albuminei, globulinelor și paraproteinelor cu sensibilitate comparabilă, drept urmare metoda biuretului este considerată ca referință și este recomandată pentru compararea altor metode analitice pentru detectarea proteinelor în urină. Metoda biuretului pentru determinarea proteinelor în urină se efectuează de preferință în laboratoarele care deservesc secțiile de nefrologie și se utilizează în cazurile în care rezultatele determinării prin alte metode sunt îndoielnice, precum și pentru a determina cantitatea de pierdere zilnică de proteine ​​la pacienții nefrologici.

Metoda Lowry, care are o sensibilitate mai mare decât metoda biuretului, combină reacția biuretului și reacția Folin pentru aminoacizii tirozină și triptofan din molecula proteică. În ciuda sensibilității sale ridicate, această metodă nu oferă întotdeauna rezultate fiabile în determinarea conținutului de proteine ​​în urină. Motivul pentru aceasta este interacțiunea nespecifică a reactivului Folin cu componentele neproteice ale urinei (cel mai adesea aminoacizi, acid uric, carbohidrați). Separarea acestor și a altor componente urinare prin dializă sau precipitare de proteine ​​permite utilizarea cu succes a acestei metode pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină. Unele medicamente - salicilații, clorpromazina, tetraciclinele pot afecta această metodă și pot distorsiona rezultatele studiului.

Sensibilitatea suficientă, reproductibilitatea bună și ușurința determinării proteinelor prin legarea coloranților fac ca aceste metode să fie promițătoare, dar costul ridicat al reactivilor împiedică utilizarea lor mai largă în laboratoare. În prezent, metoda cu roșu pirogalol devine din ce în ce mai răspândită în Rusia.

Când se examinează nivelul proteinuriei, trebuie avut în vedere că diferite metode de determinare a proteinuriei au sensibilitate și specificitate diferite pentru numeroase proteine ​​​​urinice.

Pe baza datelor empirice, se recomandă determinarea proteinei prin două metode diferite și calcularea valorii adevărate folosind una dintre următoarele formule: proteinurie = 0,4799 B + 0,5230 L; proteinurie = 1,5484 B - 0,4825 S; proteinurie = 0,2167 S + 0,7579 L; proteinurie = 1,0748 P - 0,0986 B; proteinurie = 1,0104 P - 0,0289 S; proteinurie = 0,8959 P + 0,0845 L; unde B este rezultatul măsurării cu Coomassie G-250; L este rezultatul măsurării cu reactiv Lowry; P este rezultatul măsurării cu pirogalol molibdat; S este rezultatul măsurării cu acid sulfosalicilic.

Luând în considerare fluctuațiile pronunțate ale nivelului de proteinurie în diferite momente ale zilei, precum și dependența concentrației de proteine ​​​​din urină de diureză, conținutul său diferit în porțiuni individuale de urină, acum este obișnuit să se evalueze severitatea proteinuriei în patologia renală prin pierderea zilnică de proteine ​​în urină, adică să se determine proteinuria zilnică. Se exprimă în g/zi.

Dacă este imposibilă colectarea zilnică a urinei, se recomandă determinarea concentrației de proteine ​​și creatinine într-o singură porție de urină. Deoarece rata de eliberare a creatininei în timpul zilei este destul de constantă și nu depinde de modificările ratei de urinare, raportul dintre concentrația de proteine ​​​​și concentrația de creatinine este constant. Acest raport se corelează bine cu excreția zilnică de proteine ​​și, prin urmare, poate fi utilizat pentru a evalua severitatea proteinuriei. În mod normal, raportul proteină/creatinină ar trebui să fie mai mic de 0,2. Proteinele și creatinina sunt măsurate în g/l. Un avantaj important al metodei de evaluare a severității proteinuriei prin raportul proteină-creatinină este eliminarea completă a erorilor asociate cu imposibilitatea sau colectarea incompletă a urinei zilnice.

Literatură:

O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, „Aspecte clinice ale detectării și evaluării proteinuriei”, Manualul șefului CDL, nr. 1, ianuarie 2007

A. V. Kozlov, „Proteinuria: metode pentru detectarea ei”, prelegere, Sankt Petersburg, SPbMAPO, 2000

VL Emanuel, „Diagnosticul de laborator al bolilor de rinichi. Sindromul urinar”, - Manualul șefului CDL, nr. 12, decembrie 2006.

IN SI. Pupkova, L.M. Prasolova - Metode pentru determinarea proteinelor în urină (revizuire a datelor din literatură)

Manual de metode de cercetare de laborator clinic. Ed. E. A. Kost. Moscova, „Medicina”, 197