Standar “Penentuan protein dalam urin dengan metode ekspres”. Protein dalam urin, tes laboratorium

Metode Brandberg – Roberts – Stolnikov mengacu pada metode semi kuantitatif untuk menentukan total protein dalam urin. Metode ini didasarkan pada uji cincin Heller, yang terdiri dari fakta bahwa di perbatasan asam nitrat dan urin, dengan adanya protein, ia menggumpal dan muncul cincin putih.

Reagen

larutan asam nitrat 50% atau Reagen Larionova.
Pembuatan reagen Larionova : siapkan larutan natrium klorida jenuh (20 - 30 g garam dilarutkan dalam 100 ml air bila dipanaskan, diamkan hingga dingin). Cairan supernatan dikeringkan dan disaring. Ke dalam 99 ml filtrat tambahkan 1 ml asam nitrat pekat. Selain asam nitrat, Anda bisa menambahkan 2 ml asam klorida pekat.

Kemajuan tekad

1 - 2 ml asam nitrat (atau pereaksi Larionat) dituangkan ke dalam tabung reaksi, asam dibiarkan mengalir dari dinding tabung reaksi (5 - 8 menit), jika tidak, ketika protein urin dilapis, akan terbentuk kekeruhan karena tercampurnya asam nitrat pada dinding tabung reaksi dengan urin, yang mencegah pembentukan cincin yang berbeda. Oleh karena itu, sebaiknya siapkan terlebih dahulu rangkaian tabung reaksi yang berisi asam. Dengan menggunakan pipet, lapisi dengan hati-hati cairan yang telah disaring dalam jumlah yang sama di sepanjang dinding tabung reaksi. urin jernih, hati-hati jangan sampai mengaduk cairan di dalam tabung reaksi. Munculnya cincin putih tipis pada antarmuka kedua cairan antara menit ke-2 dan ke-3 menunjukkan adanya protein pada konsentrasi kurang lebih 0,033 g/l. Waktu pelapisan dihitung seperempat menit.

Jika cincin muncul lebih awal dari 2 menit setelah pelapisan, urin harus diencerkan dengan air dan urin yang sudah diencerkan harus dilapisi kembali. Tingkat pengenceran urin dipilih tergantung pada jenis cincin, yaitu lebar, kekompakan, dan waktu kemunculannya. Jika muncul cincin seperti benang sebelum 2 menit, maka urin diencerkan 2 kali, jika lebar - 4 kali, jika padat - 8 kali, dst. Pengenceran urin dilakukan dalam tabung centrifuge takar, urin dituangkan ke dalam tanda 1 ml dan tambahkan air sampai tanda berapa kali pengenceran dilakukan. Isi tabung reaksi tercampur rata dengan pipet Pasteur dan balon. Jika kekeruhan muncul saat mengencerkan urin, campuran harus disaring kembali dan hanya filtrat bening yang boleh dilapisi dengan asam nitrat. Konsentrasi protein dihitung dengan mengalikan 0,033 dengan derajat pengenceran dan dinyatakan dalam gram per liter (g/l). Pilih pengenceran urin sedemikian rupa sehingga ketika dilapiskan pada asam nitrat, muncul cincin pada menit ke-2 – ke-3.

Jika cincin terbentuk pada urin murni atau encer antara menit ke-1 dan ke-4, Anda dapat menggunakan koreksi Ehrlich-Althausen agar urin tidak semakin encer (ini menghemat waktu). Penulis mengusulkan untuk menentukan waktu kemunculan cincin seperti benang dan memasukkan koreksi waktu ke dalam perhitungan. Dalam hal ini, jumlah protein dihitung dengan mengalikan 0,033 g/l dengan derajat pengenceran dan koreksi.

Apabila terbentuk cincin, sebelum waktu 1 menit berlalu, perlu dilakukan satu kali pengenceran fraksional, yaitu 1,5 kali (dua bagian urin dan 1 bagian air). Pengenceran ini juga diperhitungkan saat menghitung jumlah protein dalam urin.

Contoh penentuan protein total dalam urin menggunakan metode Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Ketika urin dilapiskan pada reagen, sebuah cincin lebar segera terbentuk. Encerkan urine 4 kali (1 bagian urine + 3 bagian air), lapis; Cincin seperti benang segera diperoleh. Pengenceran yang ada perlu diencerkan sebanyak 2 kali lagi; Saat melapiskan pengenceran ini, sebuah cincin terbentuk setelah 1,5 menit. Tidak perlu berkembang biak lebih jauh lagi.

Perhitungan protein: urine diencerkan 4 dan 2 kali, jadi 8 kali. Jumlah proteinnya adalah 0,033*8*1 1/4 = 0,33 g/l

Kekurangan metode Brandberg-Roberts-Stolnikov:

• subyektivitas,
• intensitas tenaga kerja,
• penurunan keakuratan penentuan konsentrasi protein saat urin diencerkan.

Lihat juga:

Literatur:

• Buku Pegangan "Metode penelitian laboratorium di klinik" ed. Prof. V.V.Menshikova. - Moskow, "Kedokteran", 1987
• L.V.Kozlovskaya, A.Yu. tutorial tentang metode penelitian laboratorium klinis. Moskow, Kedokteran, 1985
• A.Ya
• A. Ya.

Solusi: larutan nitrogen 50% atau larutan larion. Tata cara penentuan: deretan tabung reaksi diletakkan pada dudukan dan dituang 1 ml larutan nitrogen, ditambahkan 1 ml urin, dilapiskan pada reagen dan dicatat waktu munculnya cincin, dicatat waktu munculnya cincin . Jika cincinnya lebar, encerkan urinnya.

4. Penentuan konsentrasi protein dalam urin dengan asam sulfosalisilat 3%.

Larutan: CK 3%, natrium klorida 9%, larutan albumin 10%. Prosedur penentuan: 1,25 ml urin bening ditempatkan dalam dua tabung sentrifus pengukur “O” - eksperimen dan “K” - kontrol. Tambahkan 3,75 ml larutan asam sulfosalisilat 3% ke dalam larutan percobaan, dan 3,75 ml larutan natrium klorida 0,9% ke dalam larutan kontrol. Biarkan selama 5 menit, lalu fotometerisasi pada FEC pada panjang gelombang 590 - 650 nm (filter oranye atau merah) dalam kuvet dengan ketebalan lapisan 5 mm, eksperimen versus kontrol. Perhitungan dilakukan sesuai jadwal atau tabel kalibrasi. Prinsip metode ini didasarkan pada fakta bahwa protein dengan asam sulfosalisilat menghasilkan kekeruhan yang intensitasnya berbanding lurus dengan konsentrasi protein.

5. deteksi glukosa dalam urin Tes Gaines-Akimov. Prinsip: Glukosa, bila dipanaskan dalam lingkungan basa, mereduksi tembaga dihidroksida ( warna kuning) menjadi tembaga monohidroksida (warna oranye-merah). Persiapan reagen: 1) 13,3 g bahan kimia. tembaga sulfat kristal murni (CuSO 4 . larutan 5 H 2 O). dalam 400 ml air. 2) 50g natrium hidroksida dilarutkan dalam 400ml air. 3) 15g gliserin murni diencerkan dalam 200ml air. Campur larutan pertama dan kedua dan segera tambahkan larutan ketiga. Rak reagen. Kemajuan tekad: Tambahkan 1 tetes urin dan 9 tetes reagen ke dalam tabung reaksi dan didihkan dalam penangas air selama 1-2 menit. Tes positif: warna kuning atau oranye pada cairan atau sedimen.

6. Definisi kualitatif glukosa dalam urin menggunakan metode glukosa oksidase. Prinsip metode ini: glukosa dioksidasi dengan adanya glukosa oksidase, menurut reaksi: Glukosa + O 2 glikonolantom + H 2 O 2. Peroksida H yang dihasilkan di bawah aksi peroksidase mengoksidasi substrat untuk membentuk produk berwarna.

Tambahkan dan inkubasi selama 15 menit pada suhu 37 0 C. Lihat pada CPK, kuvet 5mm.

Kemudian dilakukan perhitungan dengan menggunakan rumus: C op = Ext op . Cst/ Dll st.

7. Deteksi badan keton dalam urin dengan uji Lestrade. Bubuk atau tablet larutan Lestrade dioleskan pada kaca objek (di ujung pisau bedah), dan 2-3 tetes urin diteteskan ke dalamnya. Jika terdapat badan keton, akan muncul warna merah jambu hingga ungu. Sampel dievaluasi dengan latar belakang putih.

8. Deteksi pigmen darah pada urin dengan pengujian dengan larutan alkohol 5% dari midopyrine.

1.5% larutan alkohol middleopyrine (0,5 g middleopyrine dilarutkan dalam 10 ml alkohol 96%) 2,3% larutan peroksida hidrogen, 1,5 g hidropirit dilarutkan dalam 50 ml air) Prosedur: 2-3 ml ekstrak asetat eter atau urin kocok tanpa filter dituangkan ke dalam tabung reaksi 3% ditambahkan larutan hidrogen peroksida; perhitungkan hasilnya selambat-lambatnya 2-3 menit. Sampel dianggap positif jika berwarna abu-abu ungu.

Deteksi urobilin dalam urin dengan tes Neubauer.

Hal ini didasarkan pada reaksi warna urobilinogen dengan reagen Ehrlich, yang terdiri dari 2 g paradimethylaminobenaldehyde dan 100 ml larutan asam klorida (200 g l-1). Prosedur penentuan: Beberapa tetes larutan Ehrlich ditambahkan ke beberapa ml urin yang baru dikeluarkan (untuk 1 ml urin dan per 1 ml larutan. Munculnya warna merah dalam 30 detik pertama menunjukkan peningkatan urobilinogen. Biasanya, warna muncul kemudian atau tidak ada sama sekali. Saat urin berdiri, urobilinogen berubah menjadi urobilin dan sampel mungkin negatif palsu. Sampel tidak dapat dipanaskan, karena senyawa kompleks samping aldehida dengan porfirin, indol, dan obat-obatan dapat terbentuk.

Deteksi bilirubin dalam urin dengan tes Rosin.

Larutan alkohol yodium (10 g.l): 1 g kristal yodium dilarutkan dalam silinder berkapasitas 100 ml dalam 20-30 ml 96 g alkohol rektifikasi, kemudian ditambahkan alkohol hingga tanda batas ke dalam tabung reaksi kimia 4-5 ml urin uji dan dengan hati-hati lapisi larutan alkohol yodium di atasnya (jika urin memiliki kepadatan relatif rendah, maka harus dilapis dengan larutan alkohol yodium jika ada bilirubin). pada batas antara cairan akan terdapat cincin berwarna hijau (bila diminum antipirin, begitu pula bila ada soda dalam urin, tes pigmen darahnya positif).

Pemeriksaan urin menggunakan metode kimia kering (monopolytest).

Prinsip. Metode ini didasarkan pada pengaruh protein terhadap warna indikator dalam larutan buffer, akibatnya pewarna berubah warna dari kuning menjadi biru.

Saat melakukan reaksi keberadaan protein dalam urin dan menentukan pH menggunakan kertas indikator, disarankan untuk mengikuti petunjuk berikut:

1. Kumpulkan urin di piring yang sudah dicuci bersih.
2. Gunakan urin yang baru dikumpulkan dan bebas bahan pengawet.
3. Tutup kotak pensil dengan hati-hati setelah dikeluarkan. kuantitas yang dibutuhkan potongan kertas indikator.
4. Jangan sentuh zona indikator dengan jari Anda.
5. Gunakan hanya dalam tanggal kedaluwarsa yang tertera pada label.
6. Ikuti aturan penyimpanan kertas indikator.
7. Evaluasi hasilnya sesuai dengan instruksi dalam instruksi.

Melakukan tes urin menggunakan alat analisa kimia urin kering.

Kemajuan tekad. Sepotong kertas indikator dikeluarkan dari kotak pensil dan direndam dalam urin yang diuji sehingga kedua zona indikator dibasahi secara bersamaan. Setelah 2-3 detik, strip diletakkan di atas piring kaca putih. Segera nilai pH menggunakan skala warna pada kotak pensil. Nilai pH pada skala warna sama dengan 6,0 (atau kurang); 7.0; 8.0; 9.0.

Preparasi urin, penyiapan sediaan dari sedimen urin untuk pemeriksaan mikroskopis dengan metode perkiraan.

Pemeriksaan mikroskopis sedimen urin dilakukan dengan metode perkiraan kapan analisis umum dan penghitungan kuantitatif unsur-unsur yang terbentuk untuk penilaian derajat luikocyturia dan hematuria yang lebih akurat.

Aturan penyiapan sedimen urin untuk mikroskop.

Porsi urin pagi pertama harus diperiksa secara mikroskopis.

Setelah dilakukan pencampuran awal, diambil 10 ml urin dan disentrifugasi selama 10 menit dengan kecepatan 1500 rpm.

Kemudian tabung centrifuge yang berisi urin dibalik dengan gerakan tajam, dan cairan supernatan segera dituangkan ke dalam toples kosong.

Aduk, teteskan pada kaca objek dan tutup dengan hati-hati dengan kaca penutup.

Jika endapan terdiri dari beberapa lapisan, maka siapkan sediaan, kemudian disentrifugasi kembali dan siapkan sediaan dari masing-masing lapisan secara terpisah.

Jika tidak ada sedimen yang terlihat oleh mata, setetes urin diteteskan pada kaca objek dan diperiksa secara mikroskopis.

Mula-mula bahan diperiksa dengan perbesaran rendah (lensa mata 7-10, objektif 8), kondensor diturunkan, bukaan sedikit menyempit, kemudian sediaan dipelajari secara detail di pembesaran tinggi(lensa mata 10.7; objektif 40).

14.Studi kuantitatif sedimen urin menurut Nechiporenko.

Metode ini digunakan untuk proses inflamasi laten dan lamban (pielonefritis, glomerulonefritis), piuria laten. Untuk mempelajari proses patologis dalam dinamika. Untuk menilai efektivitas pengobatan. Keuntungan dari metode ini: secara teknis sederhana, tidak memerlukan urin dalam jumlah banyak dan tahan lama. penyimpanannya digunakan dalam praktik rawat jalan. Kewajiban kondisi: urin pagi, porsi sedang, larutan asam (dalam urin basa mungkin terdapat disintegrasi sebagian elemen seluler). 1. Campurkan urine 2. Masukkan 10 ml urine ke dalam tabung centrifuge takar dan centrifuge selama 10 menit dengan kecepatan 1500 rpm. 3. Setelah sentrifugasi. menghisap Pipet bagian atas cairan, biarkan. tepat 1 ml sedimen. 4. Sedimen tercampur rata dan ruangan Goryaev terisi. 5. 3-5 menit setelah pengisian, mulailah menghitung unsur yang terbentuk. 6. Menghitung leukosit, Er, silinder dengan lensa mata 15, lensa 8 dengan kelalaian. kondensor, dalam 100 ruang persegi besar. Leukosit, Er dihitung secara terpisah, silinder (setidaknya 4 ruang Goryaev dihitung) dan medianya dikeluarkan. arif. X=SEBUAH x 0,25x 10 6 /l. Norma: leuk. 2-4x 10 6 /l, Er hingga 1 x 10 6 /l, silinder hingga 0,02 x 10 6 /l (satu untuk 4 ruang). Pada anak-anak: leukemia. hingga 2-4x 10 6 /l, Er hingga 0,75 x 10 6 /l, silinder hingga 0,02 x 10 6 /l.

15. Pemeriksaan urin menurut Zimnitsky

Tes ini menentukan kemampuan ginjal untuk berkonsentrasi. dan mengencerkan urin. Inti dari segel sampel. dalam definisi dinamis kepadatan relatif dan jumlah urin dalam porsi tiga jam di siang hari. Melakukan tes: setelah mengosongkan Kandung kemih pada jam 6 pagi di toilet, pasien mengumpulkan urin ke dalam toples terpisah setiap tiga jam pada siang hari. Total 8 porsi. Kemajuan penelitian : 1. Penyampaian. Urine ditempatkan per jam dan kuantitas serta kepadatan relatif ditentukan di setiap porsi. 2. Bandingkan jumlah urin harian dan jumlah cairan yang diminum untuk menentukannya. % dari ekskresinya. 3. Hitung diuresis siang dan malam, jumlahkan, dan dapatkan diuresis harian. 4. Menetapkan rentang fluktuasi kuantitas dan relatif. kepadatan urin per hari yaitu berapa selisih porsi terkecil dan terbesar. Menunjukkan. sampel dari orang sehat orang: 1. Diuresis harian 800-1500 ml. 2. Diuresis siang hari lebih dominan dibandingkan diuresis malam hari. 3. Fluktuasi volume urin dalam porsi tertentu cukup signifikan (dari 50 hingga 400 ml). 4. Fluktuasi p dari 1,003 hingga 1,028, harus lebih dari 0,008. Dengan fungsi gagal ginjal: hipostenuria, hipoisostenuria, isostenuria, hiperstenuria, oliguria, anuria, nokturia.

16. Deskripsi sifat umum feses.

Biasanya, feses terdiri dari hasil sekresi dan ekskresi saluran pencernaan, sisa makanan yang tidak tercerna atau tercerna sebagian, dan flora mikroba. Jumlah fesesnya 100-150 g. Konsistensinya padat. Bentuknya silindris. Baunya biasa saja. Warna cokelat. R-tion - netral, sedikit basa atau sedikit asam (pH 6,5-7,0-7,5). Tidak ada lendir. Tidak ada darah. Tidak ada sisa makanan yang tidak tercerna.

Protein dalam urin: metode penentuan

Proteinuria patologis adalah salah satu tanda penyakit ginjal dan saluran kemih yang paling penting dan permanen. Penentuan konsentrasi protein dalam urin merupakan elemen wajib dan penting dalam tes urin. Identifikasi dan penilaian kuantitatif proteinuria penting tidak hanya dalam diagnosis banyak penyakit ginjal primer dan sekunder; penilaian perubahan tingkat keparahan proteinuria dari waktu ke waktu membawa informasi tentang jalannya proses patologis dan efektivitas pengobatan. Deteksi protein dalam urin, meskipun dalam jumlah kecil, seharusnya meningkatkan tanda bahaya terhadap kemungkinan penyakit ginjal atau saluran kemih dan memerlukan pengujian berulang. Yang paling perlu diperhatikan adalah tidak ada gunanya pemeriksaan urin dan, khususnya, penentuan protein urin tanpa memperhatikan semuanya aturan pengumpulannya.

Semua metode penentuan protein dalam urin dapat dibagi menjadi:

Kualitas tinggi,

Semi-kuantitatif,

Kuantitatif.

Metode kualitatif

Semua tes kualitatif untuk protein dalam urin berdasarkan kemampuan protein untuk mengalami denaturasi di bawah pengaruh berbagai faktor fisik dan kimia. Jika terdapat protein dalam sampel urin yang diuji, maka akan muncul kekeruhan atau sedimen flokulan.

Syarat penentuan protein dalam urin berdasarkan reaksi koagulasi:

Urine harus bersifat asam. Urine basa diasamkan dengan beberapa (2 - 3) tetes asam asetat (5 - 10%).

Urine harus jernih. Kekeruhan dihilangkan melalui filter kertas. Jika kekeruhan tidak hilang, tambahkan bedak atau magnesia bakaran (sekitar 1 sendok teh per 100 ml urin), kocok dan saring.

Pengambilan sampel kualitatif sebaiknya dilakukan dalam dua tabung reaksi, salah satunya adalah tabung kontrol.

Anda harus mencari kabut pada latar belakang hitam dalam cahaya yang ditransmisikan.

Metode kualitatif untuk menentukan protein dalam urin meliputi:

Tes cincin neraka,

uji dengan asam sulfosalisilat 15 – 20%.,

tes mendidih, dan lain-lain.

Seperti yang ditunjukkan oleh banyak penelitian, tidak satupun jumlah besar metode yang diketahui untuk penentuan kualitatif protein dalam urin tidak memungkinkan diperolehnya hasil yang dapat diandalkan dan dapat direproduksi. Meskipun demikian, di sebagian besar DDL di Rusia, metode ini banyak digunakan sebagai skrining - dalam urin dengan reaksi kualitatif positif, penentuan kuantitatif protein kemudian dilakukan. Dari reaksi kualitatif, uji Heller dan uji dengan asam sulfosalisilat paling sering digunakan, namun uji dengan asam sulfosalisilat umumnya dianggap paling cocok untuk mengidentifikasi proteinuria patologis. Uji perebusan saat ini praktis tidak digunakan karena intensitas tenaga kerja dan durasinya.

Metode semi kuantitatif

KE metode semi-kuantitatif mengaitkan:

Metode Brandberg-Roberts-Stolnikov,

penentuan protein dalam urin menggunakan strip tes diagnostik.

Metode Brandberg-Roberts-Stolnikov didasarkan pada uji cincin Heller, sehingga dengan metode ini kesalahan yang sama diamati seperti pada uji Heller.

Saat ini, strip diagnostik semakin banyak digunakan untuk menentukan protein dalam urin. Untuk penentuan semikuantitatif protein dalam urin pada strip, pewarna bromofenol biru dalam buffer sitrat paling sering digunakan sebagai indikator. Kandungan protein dalam urin dinilai dari intensitas warna biru kehijauan yang berkembang setelah zona reaksi bersentuhan dengan urin. Hasilnya dinilai secara visual atau menggunakan alat analisa urin. Meskipun metode kimia kering sangat populer dan memiliki keuntungan yang nyata (kesederhanaan, kecepatan analisis), metode analisis urin secara umum dan penentuan protein pada khususnya bukannya tanpa kelemahan serius. Salah satunya, yang menyebabkan distorsi informasi diagnostik, adalah sensitivitas yang lebih besar dari indikator bromofenol biru terhadap albumin dibandingkan dengan protein lain. Dalam hal ini, strip tes terutama disesuaikan untuk mendeteksi proteinuria glomerulus selektif, ketika hampir semua protein urin adalah albumin. Dengan perkembangan perubahan dan peralihan proteinuria glomerulus selektif menjadi non-selektif (munculnya globulin dalam urin), hasil penentuan protein ternyata diremehkan dibandingkan dengan nilai sebenarnya. Fakta ini tidak memungkinkan untuk digunakan metode ini penentuan protein dalam urin untuk menilai kondisi ginjal (filter glomerulus) dari waktu ke waktu. Dengan proteinuria tubular, hasil penentuan protein juga diremehkan. Pengujian protein dengan strip tes bukan merupakan indikator yang dapat diandalkan untuk mengetahui rendahnya tingkat proteinuria (kebanyakan strip tes yang tersedia saat ini tidak mampu mendeteksi konsentrasi protein urin yang lebih rendah dari 0,15 g/L). Hasil negatif penentuan protein pada strip tidak mengecualikan adanya globulin, hemoglobin, uromukoid, protein Bence Jones dan paraprotein lainnya dalam urin.

Serpihan lendir dengan kandungan glikoprotein tinggi (misalnya saat proses inflamasi di saluran kemih, piuria, bakteriuria) dapat menetap di zona indikator strip dan menyebabkan hasil positif palsu. Hasil positif palsu mungkin juga disebabkan oleh konsentrasi yang tinggi urea. Pencahayaan yang buruk dan gangguan penglihatan warna dapat menyebabkan hasil yang tidak akurat.

Dalam hal ini, penggunaan strip diagnostik harus dibatasi pada prosedur skrining, dan hasil yang diperoleh dengan bantuan strip tersebut harus dianggap hanya sebagai indikasi.

Metode kuantitatif

Benar penentuan kuantitatif protein dalam urin dalam beberapa kasus ternyata menjadi tugas yang sulit. Kesulitan dalam menyelesaikannya ditentukan oleh sejumlah faktor berikut:

adanya banyak senyawa dalam urin yang dapat mengganggu jalannya reaksi kimia;

fluktuasi signifikan dalam kandungan dan komposisi protein urin selama berbagai penyakit, sehingga sulit untuk memilih bahan kalibrasi yang memadai.

Di laboratorium klinis, metode yang disebut “rutin” untuk menentukan protein dalam urin terutama digunakan, namun tidak selalu memberikan hasil yang memuaskan.

Dari sudut pandang analis laboratorium, metode yang dimaksudkan untuk penentuan kuantitatif protein dalam urin harus memenuhi persyaratan berikut:

memiliki hubungan linier antara penyerapan kompleks yang terbentuk selama reaksi kimia dan kandungan protein dalam sampel pada rentang konsentrasi yang luas, yang akan menghindari operasi tambahan saat menyiapkan sampel untuk penelitian;

harus sederhana, tidak memerlukan kualifikasi tinggi dari pemain, dan dilakukan dengan sejumlah kecil operasi;

memiliki sensitivitas tinggi dan keandalan analitis saat menggunakan bahan uji dalam jumlah kecil;

tahan terhadap berbagai faktor (fluktuasi komposisi sampel, keberadaan obat, dll);

memiliki biaya yang dapat diterima;

mudah beradaptasi dengan penganalisis otomatis;

hasil penentuan tidak boleh bergantung pada komposisi protein sampel urin yang diuji.

Tak satu pun dari metode yang diketahui saat ini untuk penentuan kuantitatif protein dalam urin dapat sepenuhnya diklaim sebagai “standar emas”.

Metode kuantitatif untuk menentukan protein dalam urin dapat dibagi menjadi turbidimetri dan kolorimetri.

Metode turbidimetri

Metode turbidimetri meliputi:

penentuan protein dengan asam sulfosalisilat (SSA),

penentuan protein dengan asam trikloroasetat (TCA),

penentuan protein dengan benzethonium klorida.

Metode turbidimetri didasarkan pada penurunan kelarutan protein urin karena pembentukan suspensi partikel tersuspensi di bawah pengaruh zat pengendap. Kandungan protein dalam sampel uji dinilai berdasarkan intensitas hamburan cahaya, ditentukan oleh jumlah partikel hamburan cahaya (metode analisis nefelometri), atau dengan redaman fluks cahaya oleh suspensi yang dihasilkan (metode analisis turbidimetri). ).

Jumlah hamburan cahaya dalam metode presipitasi untuk mendeteksi protein dalam urin bergantung pada banyak faktor: laju pencampuran reagen, suhu campuran reaksi, nilai pH medium, keberadaan senyawa asing, dan metode fotometrik. Kepatuhan yang cermat terhadap kondisi reaksi akan menghasilkan pembentukan suspensi yang stabil dengan ukuran partikel yang konstan dan hasil yang relatif dapat direproduksi.

Beberapa obat mempengaruhi hasil metode turbidimetri untuk menentukan protein dalam urin, sehingga menghasilkan apa yang disebut hasil “positif palsu” atau “negatif palsu”. Ini termasuk beberapa antibiotik (benzilpenisilin, kloksasilin, dll.), zat yang mengandung radiokontras yodium, dan obat sulfonamida.

Metode turbidimetri sulit untuk distandarisasi dan sering kali memberikan hasil yang salah, namun meskipun demikian, metode tersebut saat ini banyak digunakan di laboratorium karena rendahnya biaya dan ketersediaan reagen. Metode yang paling banyak digunakan di Rusia untuk penentuan protein adalah asam sulfosalisilat.

Metode kolorimetri

Yang paling sensitif dan akurat adalah metode kolorimetri untuk menentukan total protein urin, berdasarkan reaksi warna spesifik protein.

Ini termasuk:

reaksi biuret,

Metode Lowry,

metode berdasarkan kemampuan berbagai pewarna untuk membentuk kompleks dengan protein:

Ponceau S,

Coomassie Biru Cemerlang

pirogalol merah.

Dari sudut pandang pelaku, dalam pekerjaan sehari-hari di laboratorium dengan aliran penelitian yang besar, metode biuret merepotkan karena banyaknya operasi. Pada saat yang sama, metode ini memiliki ciri keandalan analitik yang tinggi, memungkinkan penentuan protein dalam berbagai konsentrasi dan deteksi albumin, globulin, dan paraprotein dengan sensitivitas yang sebanding, sehingga metode biuret dianggap sebagai metode referensi dan direkomendasikan untuk perbandingan metode analisis lain untuk mendeteksi protein dalam urin. Metode biuret untuk menentukan protein dalam urin sebaiknya dilakukan di laboratorium yang melayani departemen nefrologi, dan digunakan dalam kasus di mana hasil penentuan menggunakan metode lain dipertanyakan, serta untuk menentukan jumlah kehilangan protein harian pada pasien nefrologi.

Metode Lowry yang lebih sensitif dibandingkan metode biuret, menggabungkan reaksi biuret dan reaksi Folin terhadap asam amino tirosin dan triptofan dalam molekul protein. Meskipun sensitivitasnya tinggi, metode ini tidak selalu memberikan hasil yang dapat diandalkan dalam menentukan kandungan protein dalam urin. Alasannya adalah interaksi nonspesifik reagen Folin dengan komponen urin non-protein (paling sering asam amino, asam urat, karbohidrat). Pemisahan komponen ini dan komponen urin lainnya melalui dialisis atau pengendapan protein memungkinkan metode ini berhasil digunakan untuk penentuan kuantitatif protein dalam urin. Beberapa obat - salisilat, klorpromazin, tetrasiklin dapat mempengaruhi metode ini dan merusak hasil penelitian.

Sensitivitas yang memadai, reproduktifitas yang baik, dan kemudahan penentuan protein dengan pengikatan pewarna membuat metode ini menjanjikan, namun tingginya biaya reagen menghalangi penggunaannya yang lebih luas di laboratorium. Saat ini, metode dengan pyrogallol red semakin meluas di Rusia.

Saat melakukan studi tentang tingkat proteinuria, harus diingat bahwa metode yang berbeda untuk menentukan proteinuria memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang berbeda untuk berbagai protein urin.

Berdasarkan data empiris, dianjurkan untuk menentukan protein dengan dua metode berbeda dan menghitung nilai sebenarnya menggunakan salah satu rumus berikut: proteinuria = 0,4799 B + 0,5230 L; proteinuria = 1,5484 B – 0,4825 S; proteinuria = 0,2167 S + 0,7579 L; proteinuria = 1,0748 P – 0,0986 B; proteinuria = 1,0104 P – 0,0289 S; proteinuria = 0,8959 P + 0,0845 L; dimana B adalah hasil pengukuran dengan Coomassie G-250; L - hasil pengukuran dengan reagen Lowry; P adalah hasil pengukuran dengan pyrogallol molybdate; S adalah hasil pengukuran dengan asam sulfosalisilat.

Mempertimbangkan fluktuasi nyata dalam tingkat proteinuria pada waktu yang berbeda dalam sehari, serta ketergantungan konsentrasi protein dalam urin pada diuresis, kandungannya yang berbeda dalam porsi urin tertentu, saat ini, dalam kasus patologi ginjal , merupakan kebiasaan untuk menilai tingkat keparahan proteinuria dengan hilangnya protein setiap hari dalam urin, yaitu menentukan apa yang disebut proteinuria harian. Dinyatakan dalam g/hari.

Jika tidak mungkin mengumpulkan urin setiap hari, dianjurkan untuk menentukan konsentrasi protein dan kreatinin dalam satu porsi urin. Karena laju ekskresi kreatinin cukup konstan sepanjang hari dan tidak dipengaruhi oleh perubahan laju keluaran urin, rasio konsentrasi protein terhadap konsentrasi kreatinin adalah konstan. Rasio ini berkorelasi baik dengan ekskresi protein harian dan oleh karena itu, dapat digunakan untuk menilai tingkat keparahan proteinuria. Biasanya, rasio protein/kreatinin harus kurang dari 0,2. Protein dan kreatinin diukur dalam g/l. Keuntungan penting dari metode menilai tingkat keparahan proteinuria menggunakan rasio protein-kreatinin adalah penghapusan kesalahan yang terkait dengan ketidakmungkinan atau tidak lengkapnya pengumpulan urin 24 jam.

Literatur:

O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, “Aspek klinis dalam mengidentifikasi dan menilai proteinuria”, Buku Pegangan kepala laboratorium klinis, No. 1, Januari 2007.

A. V. Kozlov, “Proteinuria: metode pendeteksiannya,” kuliah, St. Petersburg, St. Petersburg MAPO, 2000.

V. L. Emanuel, “Diagnosis laboratorium penyakit ginjal. Sindrom Urin,” - Direktori Kepala Laboratorium Klinik, No. 12 Desember 2006.

DALAM DAN.

Pupkova, L.M. Prasolova - Metode untuk menentukan protein dalam urin (tinjauan data literatur)