Proteine ​​în urină - metode pentru determinarea și limitele normalului (starea actuală a problemei). Proteine ​​urinare (proteinurie). Determinarea proteinelor în urină

Compoziția locului de muncă pentru determinarea proteinelor în urină include următoarele elemente:

1. Eprubete chimice, eprubete de aglutinare.
2. Set pipete gradate.
3. Pipete cu un capăt trasat îngust.
4. Lămpi cu alcool sau arzător cu gaz.
5. Foaie neagra.
6. Acid acetic glacial.
7. Acid sulfosalicilic.
8. Acid azotic concentrat.
9. Apa distilata.

Metode pentru determinarea proteinelor în urină

Toate metodele folosite pentru definiție calitativă proteinele din urină se bazează pe coagularea proteinelor. Coagularea proteinelor se manifestă prin grade variate de turbiditate (de la opalescență la turbiditate severă) sau pierderea fulgilor.

Determinarea calitativă a proteinei în urină poate fi efectuată în unul dintre următoarele moduri:

1. fierbere cu o soluție de acid acetic 10%;
2. reacție cu o soluție 20% de acid sulfosalicilic;
3. reacție cu soluție de acid azotic 50% (testul Geller);
4. reacție cu o soluție 1% de acid azotic într-o soluție saturată de sare de masă (testul Heller modificat conform Larionova).

Înainte de determinarea calitativă a proteinei în urină, se efectuează următoarele lucrări pregătitoare:
1. Urina tulbure este filtrată printr-un filtru de hârtie. Dacă nu se poate obține un filtrat limpede, se filtrează din nou prin același filtru sau se amestecă urina cu o cantitate mică de pământ infuzor sau talc, după care se filtrează.
2. Dacă urina este alcalină, se acidifică cu o soluție de acid acetic 10% până la o reacție ușor acidă sub controlul turnesolului sau hârtiei indicator universal.
3. Cu un conținut scăzut de sare (urină galben deschis sau galben pal cu greutate specifică scăzută) la fiecare
Câteva picături dintr-o soluție saturată de sare de masă sunt adăugate în probă, deoarece lipsa sărurilor provoacă coagularea proteinelor.
4. Gradul de turbiditate se observă folosind un fond negru. Ca fundal se folosește carton negru sau hârtie neagră folosită în fotografie. Luând în considerare reacția pe un fundal negru, vă permite să identificați cel mai mic grad de turbiditate.

Eprubetele numerotate sunt plasate într-un suport separat. Ei efectuează una dintre reacțiile descrise mai jos.

1. Testați prin fierbere cu o soluție de acid acetic 10%. Pentru a efectua acest test, aveți nevoie de o soluție 10% de acid acetic, care se prepară după cum urmează: 10 ml de acid acetic glacial se pun într-un cilindru și se completează cu apă distilată până la marcajul de 100 ml.

Tehnica de determinare a proteinelor. 10-12 ml de urină filtrată dintr-o reacție ușor acidă se pun într-o eprubetă chimică. Apoi, partea superioară a eprubetei cu urină este încălzită cu grijă până la fierbere și se adaugă 8-10 picături dintr-o soluție de acid acetic 10%. O eprubetă cu urină este privită pe un fundal negru în lumină transmisă. În prezența proteinelor în urină, apare turbiditate de diferite grade (de la opalescență la turbiditate severă) sau apar fulgi. Partea inferioară a eprubetei, care nu a fost încălzită, servește drept control. Acest test detectează cantitatea de proteine ​​începând de la 0,015%o (%o - promille).

2. Reacția cu o soluție 20% de acid sulfosalicilic. O soluție de acid sulfosalicilic 20% se prepară după cum urmează: 20 g de acid sulfosalicilic se dizolvă în 70-80 ml apă distilată, se transferă într-un cilindru de 100 ml și se completează cu apă distilată până la semn. Reactivul preparat este depozitat într-un recipient de sticlă închisă la culoare.

Tehnica de determinare a proteinelor. 2-3 ml de urină filtrată dintr-o reacție slab acidă se pun în două eprubete de același diametru, se adaugă 3-4 picături dintr-o soluție de acid sulfosalicilic 20% într-una dintre eprubete, cealaltă eprubetă servește ca un Control. Dacă în eprubeta cu reactiv există proteină, apare turbiditatea sau cad fulgi de proteină coagulată. În tubul de control lichidul rămâne limpede. Acidul sulfosalicilic, împreună cu proteina serică, precipită albumoze (peptide), care sunt un produs de descompunere a proteinelor. Pentru a clarifica cauza urinei tulburi, o eprubetă cu urină este încălzită. Turbiditatea cauzată de formarea proteinelor din zer crește, în timp ce turbiditatea cauzată de prezența albumozei dispare. Acest test are aceeași sensibilitate ca și cel precedent.

3. Reacția cu soluție de acid azotic 50% (testul Geller). O soluție 50% de acid azotic se prepară după cum urmează: se adaugă 50 ml apă distilată (diluție 1:1) la 50 ml acid azotic cu o greutate specifică de 1,2-1,4.

Tehnica de determinare a proteinelor. 1 ml de acid azotic 50% se toarnă într-o eprubetă mică îngustă (nămol de aglutinare). 1 ml de urină de testare filtrată este preluat într-o pipetă cu un capăt îngust extins, stratificat pe reactiv și eprubeta este transferată în poziție verticală. Când proteina este prezentă, la interfața lichidă apare un inel alb. Momentul în care apare inelul și proprietățile sale depind de cantitatea de proteine: dacă există puține proteine, inelul nu apare imediat, așa că aspectul său este monitorizat timp de 2,5-3 minute. Cantitatea minimă de proteine ​​determinată prin această metodă este de 0,033°/oo. Cu un conținut mai mic de proteine ​​în urină, nu se formează un inel. Rezultatele reacției sunt înregistrate pe un fundal negru în lumină transmisă.

4. Reacția cu o soluție de 1% de acid azotic într-o soluție saturată de sare de masă - un test Heller modificat (conform lui Larionova). Pentru a efectua testul, utilizați o soluție de acid azotic 1% preparată într-o soluție saturată de sare de masă (reactiv Larionova). Se dizolvă 35 g de sare de masă în 100 ml apă distilată, se filtrează soluția, se adaugă 99 ml din soluția saturată de sare de masă preparată la 1 ml de acid azotic concentrat cu o greutate specifică de 1,2-1,4.

Tehnica de determinare a proteinelor la fel ca și în reacția cu o soluție de acid azotic 50% (testul Geller), dar în loc de 1 ml dintr-o soluție de acid azotic 50%, se toarnă 1 ml de reactiv Larionova într-o eprubetă și se adaugă 1 ml de urină. aceasta. Apariția unui inel alb la interfața lichidelor indică prezența proteinelor în urina testată. Testul Larionova este la fel de sensibil ca și testul Heller.

5. Test colorimetric (uscat) pentru determinarea calitativă a proteinei. Un test colorimetric (uscat) pentru determinarea calitativă a proteinei în urină se bazează pe efectul pe care îl are proteina asupra culorii indicatorului dintr-o soluție tampon.

Tehnica de determinare a proteinelor. O bucată de hârtie indicator destinată determinării proteinei este scufundată în urină pt un timp scurt. Testul este considerat pozitiv dacă bucata de hârtie devine albastru-verde.

Determinarea cantitativă a proteinelor în urină

Determinarea cantitativă a proteinei în urină se bazează pe faptul că, atunci când urina care conține proteine ​​este stratificată cu o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larionova, se formează un inel alb la marginea celor două lichide, iar dacă apare un inel alb clar. cu 3 minute, apoi conținutul de proteine ​​este de 0,033% o sau 33 mg în 1000 ml de urină. Apariția unui inel mai devreme de 3 minute indică un conținut mai mare de proteine ​​în urină.
La cuantificarea proteinelor în urină, se respectă următoarele reguli:

1. Determinarea cantitativă a proteinei se efectuează numai în acele porțiuni de urină în care a fost detectată calitativ.
2. Determinarea se face cu urina filtrata cu grija.
3. Tehnica de stratificare a urinei de testat cu o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larionova într-un raport de reactiv la urină (1:1) este urmată cu strictețe.
4. Timpul de apariție a inelului este determinat cu ajutorul unui cronometru: în calculul final al cantității de proteine, se ia în considerare timpul de stratificare a urinei pe acid azotic, care este de 15 secunde.
5. Diluarea urinei se efectuează pe baza proprietăților inelului. În acest caz, fiecare diluție ulterioară de urină este pregătită din cea anterioară.
6. Inelele sunt identificate pe un fundal negru.

Cele mai comune sunt două metode pentru determinarea cantitativă a proteinei în urină: metoda Roberts-Stolnikov-Brandberg și metoda lui S. L. Ehrlich și A. Ya.

1. Metoda Roberts-Stolnikov-Brandberg. Conform acestei metode, cantitatea de proteină din urină se determină prin diluarea acesteia până când, atunci când urina este stratificată cu o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larion, inelul apare exact în 3 minute. Cantitatea de proteine ​​se calculează prin înmulțirea a 0,033% cu gradul de diluare a urinei. Rezultatul obținut exprimă cantitatea de proteine ​​​​în miligrame la 1000 ml de urină, adică în promile (%o).
2. Metoda lui S. L. Ehrlich și A. Ya Althauzen. O serie de tuburi de aglutinare sunt plasate într-un suport, în care se toarnă mai întâi 1 ml dintr-o soluție 50% de acid azotic sau reactiv Larionova. Urina de testat se prelevează cu o pipetă separată, curată, uscată, cu un capăt îngust, întins și se pune în straturi pe reactiv, după care se pornește cronometrul. Timpul de apariție a inelului este monitorizat prin plasarea eprubetei pe un fundal negru. Când apare inelul, cronometrul este oprit.

La stratificarea urinei, în funcție de cantitatea de proteine, poate apărea un inel compact, lat sau sub formă de fir. Un inel compact, larg apare imediat după stratificarea urinei pe reactiv. Inelul sub formă de fir poate apărea imediat, înainte de a trece un minut sau în decurs de unul până la patru minute.

Dacă un inel sub formă de fir apare în decurs de una până la 4 minute, nu este nevoie să diluați urina!
Pentru a calcula cantitatea de proteine ​​în acest caz, este suficient să folosiți planul de masă propus de autori (Tabelul 1).

Exemplul 1. Când urina a fost stratificată pe reactiv, în 2 minute s-a format un inel sub formă de fir. Dacă un inel s-ar fi format în 3 minute, cantitatea de proteină ar fi fost de 0,033%.

În acest caz, inelul s-a format mai devreme. Corecția corespunzătoare, conform tabelului de plan, pentru un timp de 2 minute este egală cu 1+1/8. Aceasta înseamnă că proteina dintr-o porțiune dată de urină va fi de 1+1/8 ori mai mare decât 0,033°/oo, adică 0,033%o X(1+1/8) = 0,037°/oo.

Când apare un inel sub formă de fir în decurs de 1 minut, adică după 40-60 de secunde, faceți o diluție de 1,5 ori de urină (2 părți urină + 1 parte apă), apoi stratificați din nou urina diluată pe reactiv și înregistrați aspectul a inelului. La calcularea rezultatelor, se ține cont de faptul că urina a fost diluată de 1,5 ori.

Exemplul 2. După stratificarea urinei diluate de 1,5 ori, în 2 minute a apărut un inel sub formă de fir. Dacă inelul ar fi apărut la 3 minute, proteina ar fi fost de 0,033%. Modificarea corespunzătoare conform tabelului de plan pentru un timp de 2 minute este 1+1/8. Proteina în urină conține 0,033%oX1,5X(1+1/8) = 0,056%o.

Dacă apare imediat un inel sub formă de fir, urina este diluată de 2 ori (1 parte urină + 1 parte apă). Urina diluată este din nou stratificată pe reactiv și se observă aspectul unui inel după 1 minut.

Exemplul 3. La stratificarea urinei diluate de două ori pe reactiv, a apărut un inel sub formă de fir după 1 minut și 15 secunde. Apoi, cantitatea de proteină din urina testată, prin analogie cu calculele anterioare, va fi egală cu
0,033%оХ2Х(1+3/8) = 0,091%.
Dacă apare un inel larg, urina este diluată de 4 ori (1 parte urină + 3 părți apă).
Odată cu stratificarea ulterioară a urinei diluate, un inel sub formă de fir se poate forma atât înainte, cât și după un minut. În astfel de cazuri, cantitatea de proteină este calculată prin analogie cu exemplele anterioare, adică 0,033% o este înmulțit cu gradul de diluție și corecția corespunzătoare.

Exemplul 1. După diluarea urinei de 4 ori, inelul a apărut imediat. Urina se diluează de 2 ori. După stratificarea urinei diluate de 8 ori (4X2), un inel sub formă de fir s-a format în 1,5 minute. În acest caz, cantitatea de proteină este de 0,033%oX8X1,25 = 0,33%o etc.
Când apare un inel compact, urina este diluată de 8 ori (1 parte urină + 7 părți apă). Atunci când urina diluată este ulterior stratificată pe reactiv, se poate forma fie un inel compact, larg, fie sub formă de fir.

Exemplul 2. Când urina a fost stratificată pe acid azotic, sa format imediat un inel compact. Urina este diluată de 8 ori (1 parte urină + 7 părți apă) și stratificată din nou. Acest lucru a produs din nou un inel compact. Apoi, urina este diluată încă de 8 ori (pentru a face acest lucru, luați 1 parte din urină diluată într-un cilindru sau eprubetă și adăugați 7 părți de apă). După un alt strat de urină diluată, s-a format imediat un inel sub formă de fir. Urina se diluează de 2 ori (1 parte urină + 1 parte apă). După un alt strat de urină diluată, în 2 minute s-a format un inel sub formă de fir. Cantitatea de proteină dintr-o porțiune dată de urină se calculează după cum urmează: 0,033,%oX8X8X2X(1+1/8) = 4,8%o.

În plus față de tabelul de plan, există un tabel cu cifrele de proteine ​​calculate (Tabelul 2). Dacă urina nu este diluată, atunci cantitatea de proteine ​​se găsește în coloana „Urina întreagă, nediluată”. Când diluați urina de un număr întreg de ori (8,4,2), utilizați tabelul. 1. Când diluați urina de 1,5 ori, utilizați tabelul. 2.

Tehnica de utilizare a unui tabel pentru determinarea conținutului de proteine ​​din urină

În coloanele corespunzătoare ale tabelului, indicați momentul apariției inelului și gradul de diluare a urinei.
Numărul situat la intersecția liniilor orizontale și verticale trase din acești doi indicatori indică cantitatea de proteină din urina testată (%o).

Este posibil ca, cu un test calitativ pozitiv pentru proteine, un inel să nu se formeze atunci când este stratificat cu o soluție de acid azotic 50%. Aceasta înseamnă că există mai puțin de 0,033% proteine ​​în urină. În astfel de cazuri, cantitatea de proteină din formularul de analiză este desemnată prin termenul „urme”.

Dacă proteina este cuantificată, conținutul de proteine ​​​​în promille este notat pe formularul de analiză a urinei, de exemplu, „proteină - 0,66%o”.

Pe lângă determinarea cantitativă a proteinei într-o porțiune separată de urină, se calculează cantitatea sa zilnică în grame. În acest scop, se colectează zilnic urina, se măsoară cantitatea acesteia și se determină conținutul de proteine ​​în promile. Apoi se face calculul. De exemplu, cantitatea zilnică de urină este de 1800 ml, proteina este de 7°/oo. Aceasta înseamnă că cantitatea zilnică de urină conține proteine: 1,8X7 = 12,6 g.

Principiul metodei

Intensitatea turbidității în timpul coagulării proteinelor cu acid sulfosalicilic este proporțională cu concentrația acestuia.

Reactivi necesari

eu. soluție 3% de acid sulfosalicilic.

II. Soluție de clorură de sodiu 0,9%.

III. Soluție standard de albumină- Soluție 1% (soluție 1 ml care conține 10 mg albumină): 1 g albumină liofilizată (din ser uman sau bovin) se dizolvă într-o cantitate mică de soluție de clorură de sodiu 0,9% într-un balon de 100 ml și apoi se diluează până la semn cu aceeasi solutie. Reactivul este stabilizat prin adăugarea a 1 ml de soluție de azidă de sodiu 5% (NaN 3). Când este păstrat la frigider, reactivul este bun timp de 2 luni.

Echipament special- colorimetru fotoelectric.

Progresul studiului

Se adaugă 1,25 ml de urină filtrată într-o eprubetă, se adaugă la 5 ml cu o soluție de acid sulfosalicilic 3% și se amestecă. După 5 minute, acestea sunt măsurate pe un fotoelectrocolorimetru la o lungime de undă de 590-650 nm (filtru portocaliu sau roșu) față de un control într-o cuvă cu o lungime a căii optice de 5 mm. Martorul este o eprubetă în care sa adăugat soluție de clorură de sodiu 0,9% la 1,25 ml de urină filtrată la 5 ml. Calculul se efectuează conform graficului de calibrare, pentru construcția căruia se prepară diluții din soluția standard, așa cum este indicat în tabel.

Pregătirea diluțiilor pentru construirea unui grafic de calibrare

Din fiecare soluție obținută se prelevează 1,25 ml și se prelucrează ca probe experimentale.

Dependența liniară la construirea unui grafic de calibrare este menținută până la 1 g/l. La concentrații mai mari, proba trebuie diluată, iar diluția trebuie luată în considerare la calcul.

Rezultate fals pozitive pot fi obținute dacă în urină sunt prezenți agenți de contrast care conțin iod organic. Prin urmare, testul nu trebuie utilizat în mod fals la persoanele care iau suplimente de iod. rezultat pozitiv se poate datora și utilizării de medicamente sulfa, doze mari de penicilină și concentrații mari de acid uric în urină.

Proteinuria este apariția proteinelor în urină în concentrații care fac posibilă depistarea acesteia prin metode calitative.

Distinge

• proteinurie renală şi
• proteinurie extrarenală (postrenală).

proteinurie renală

Proteinuria renală este cauzată de deteriorarea filtrului glomerular sau de disfuncția epiteliului tubului contort.

Există proteinurie selectivă și neselectivă in functie de raportul dintre anumite proteine ​​plasmatice si urinare, greutatea moleculara si sarcina acestora.

proteinurie selectivă

Proteinuria selectivă apare cu o întrerupere minimă (adesea reversibilă) a filtrului glomerular și este reprezentată de proteine ​​cu greutate moleculară mică (greutate moleculară nu mai mare de 68.000) - albumină, ceruloplasmină, transferină.

proteinurie neselectivă

Proteinuria neselectivă este mai frecventă cu leziuni mai severe ale filtrului, când proteinele moleculare mari încep să se piardă. Selectivitatea proteinuriei este un semn important de diagnostic și prognostic.

Proteinuria renală poate fi:

• organice şi
• funcţionale (fiziologice).

Proteinurie renală organică

Proteinuria renală organică apare atunci când există leziuni organice ale nefronului. În funcție de mecanismul predominant de apariție, se pot distinge anumite tipuri de proteinurie organică.

proteinurie glomerulară

Proteinuria glomerulară – cauzată de deteriorarea filtrului glomerular, apare cu glomerulonefrite și nefropatii asociate cu boli metabolice sau vasculare. (glomerulonefrită, hipertensiune arterială, factori infecțioși și alergici, decompensare cardiacă)

proteinurie tubulară

Proteinuria tubulară este asociată cu incapacitatea tubilor de a reabsorbi proteinele plasmatice cu greutate moleculară mică care au trecut prin filtrul glomerular nemodificat. (amiloidoza, necroza tubulara acuta, nefrita interstitiala, sindromul Fanconi)

proteinurie prerenală

Proteinurie prerenală (excesivă) - se dezvoltă în prezența unei concentrații plasmatice neobișnuit de mare de proteine ​​cu greutate moleculară mică, care este filtrată de glomeruli normali într-o cantitate care depășește capacitatea fiziologică a tubilor de reabsorbție. (mielom, necroză musculară, hemoliză eritrocitară)

Proteinurie renală funcțională

Proteinuria funcțională renală nu este asociată cu boala renală și nu necesită tratament.

Proteinuria funcțională include:

• marș,
• emoţional,
• rece,
• intoxicaţie,
• ortostatic (numai la copii și numai în poziție în picioare).

proteinurie extrarenală (postrenală).

Cu proteinurie extrarenală (postrenală), proteinele pot pătrunde în urină din tractul urinar și genital (cu colpită și vaginită - cu urină colectată incorect). ÎN în acest caz, acesta nu este altceva decât un amestec de exsudat inflamator.

Proteinuria extrarenală, de regulă, nu depășește 1 g/zi și este adesea tranzitorie.

Diagnosticare proteinurie extrarenală Un test cu trei pahare și un examen urologic ajută.

Proteinuria postrenală apare cu cistita și uretrita.

Metode pentru determinarea proteinelor în urină

O condiție necesară Când se efectuează teste pentru prezența proteinelor, urina este absolut transparentă.

Probele calitative

Testați cu acid sulfosalicilic

3-4 ml de urină filtrată se toarnă în două eprubete. Adăugați 6-8 picături dintr-o soluție 20% de acid sulfosalicilic în eprubetă. Al doilea tub este controlul. Pe un fundal întunecat, tubul de control este comparat cu eprubeta. Dacă proteina este prezentă în probele de urină, apare turbiditatea opalescentă.

Rezultatul este indicat după cum urmează:

• reacție slab pozitivă (+),
• pozitiv (++),
• puternic pozitiv (+++).

Proba este foarte sensibilă.

Puteți folosi și o probă uscată, atunci când la câțiva mililitri de urină se adaugă mai multe cristale de acid sulfosalicilic sau hârtie de filtru preimpregnate cu o soluție din acest acid.

False pozitive poate fi cauzată de administrarea de preparate cu iod, medicamente sulfa, doze mari de penicilină și prezența acidului uric în concentrații mari în urină.

Testul acidului azotic (testul Geller)

Într-o eprubetă se toarnă 1–2 ml dintr-o soluție de acid azotic 50%, apoi o cantitate egală de urină este stratificată pe acid. Când proteina este prezentă, la interfața a două lichide apare un inel alb. Uneori, un inel roșcat se formează puțin deasupra limitei dintre lichide. Violet din prezenta uratilor. Inelul urat, spre deosebire de inelul proteic, se dizolvă la o încălzire ușoară.

Probă strălucitoare

Testul de fierbere luminos și testele de screening pentru proteinurie (probe colorimetrice uscate) nu necesită practic reactiv.

Când urina care conține proteine ​​este fiartă, se denaturează, formând un precipitat asemănător norului sau fulgi care nu sunt solubili în acid acetic 6%, spre deosebire de sărurile de fosfat. Testele de screening se bazează pe capacitatea unei proteine ​​(albumină) de a schimba culoarea hârtiei acoperite cu un indicator (de obicei albastru de bromofenol) și un tampon. Relația directă dintre intensitatea culorii hârtiei indicator (Albufan, Albutest - Cehia; Labstix, Multistix - SUA; Comburtest - Germania) și cantitatea de proteine ​​ne permite să estimăm aproximativ cantitatea de proteinurie. Cu toate acestea, testele de screening utilizate în prezent nu sunt lipsite de dezavantaje. În special, albastrul de bromofenol nu detectează proteina Bence Jones.

Metode cantitative

Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov

Metoda se bazează pe o probă calitativă cu acid azotic. Procedura de testare este descrisă mai sus. Apariția unui inel subțire la limita celor două lichide între al 2-lea și al 3-lea minute după stratificare indică prezența a 0,033 g/l de proteină în urină (concentrația de proteine ​​​​în urină este de obicei exprimată în ppm, adică grame pe litru). Dacă inelul apare mai devreme de 2 minute, urina trebuie diluată cu apă. Selectați o diluare a urinei astfel încât, atunci când este stratificată pe acid azotic, un inel să apară în al 2-3-lea minut. Gradul de diluție depinde de lățimea și compactitatea inelului și de momentul apariției acestuia.

Concentrația proteinei se calculează prin înmulțirea a 0,033 g/l cu gradul de diluare a urinei (Tabelul 8).

Metoda de diluare Roberts-Stolnikov are o serie de dezavantaje: este subiectivă, necesită multă muncă, iar acuratețea determinării concentrației de proteine ​​scade pe măsură ce urina este diluată.

Cele mai convenabile și precise metode sunt metodele nefelometrice și biuret.

Metoda nefelometrică

Pe baza proprietății proteinei de a produce turbiditate cu acid sulfosalicilic, a cărui intensitate este proporțională cu concentrația proteinei. Se toarnă 1,25 ml de urină filtrată într-o eprubetă gradată și se adaugă o soluție de acid sulfosalicilic 3% la un volum de 5 ml, amestecată bine. După 5 minute, extincția este măsurată pe FEK-M (sau orice alt fotometru) la o lungime de undă de 590-650 nm (filtru portocaliu sau roșu) față de control într-o cuvă cu o grosime a stratului de 0,5 cm. Pentru control, 1,25 ml de urină filtrată se folosește ( la fel), la care se adaugă o soluție izotonică de clorură de sodiu la un volum de 5 ml.

Mai întâi se construiește o curbă de calibrare a dependenței valorii de extincție de concentrația de proteine. Pentru a prepara diferite concentrații de proteine, se folosește o soluție standard de albumină (din ser uman sau bovin). Completați fișa de lucru.

Metoda biuretului

Se bazează pe capacitatea proteinei de a produce, cu sulfat de cupru și alcalii caustice, un complex de biuret de culoare violet, a cărui intensitate a culorii este direct proporțională cu cantitatea de proteine. La 2 ml de urină se adaugă 2 ml soluție de acid tricloracetic pentru a precipita proteina și se centrifughează. Lichidul supernatant este turnat. La precipitat (proteină) se adaugă 4 ml de soluție de NaOH 3% și 0,1 ml de soluție de sulfat de cupru 20%, se agită și se centrifugă. Lichidul violet supernatant este fotometrat la o lungime de undă de 540 nm (filtru verde) față de apă distilată într-o cuvă cu o grosime a stratului de 1,0 cm. Concentrația de proteine ​​este determinată dintr-un tabel obținut experimental (se construiește o curbă de calibrare). metodă).

Testul ortostatic

Indicat pentru suspiciunea de proteinurie ortostatică și nefroptoză. După golirea completă Vezica urinara Subiectul menține o poziție orizontală timp de 2 ore Apoi, fără să se ridice, dă o porție (de control) de urină. Pe parcursul următoarelor 2 ore, subiectul merge continuu, menținând poziția de maximă lordoză lombară (ținând un băț în spatele spatelui), după care dă o a doua porție de urină. În ambele porțiuni de urină se determină concentrația de proteine ​​și conținutul de proteine ​​în grame, iar în caz de nefroptoză se determină numărul de globule roșii din 1 ml. Cu proteinurie ortostatică, proteinurie sau o creștere a conținutului inițial de proteine ​​în grame este detectată în a doua porție. Apariția hematuriei, adesea în combinație cu urme de proteinurie în a doua porțiune, este caracteristică nefroptozei.

Determinarea uroproteinelor Bence Jones

Proteinele Bence Jones sunt paraproteine ​​cu greutate moleculară mică labile termic (greutate moleculară relativă 20.000-45.000) găsite în principal în mielomul multiplu și macroglobulinemia Waldenström. Sunt lanțuri ușoare de imunoglobuline. Datorită greutății lor moleculare scăzute, lanțurile L trec ușor din sânge printr-un filtru renal intact în urină și pot fi detectate acolo folosind o reacție de termoprecipitare. Este recomandabil să se efectueze studiul numai dacă testul cu acid sulfosalicilic este pozitiv. Determinarea se efectuează după cum urmează. La 10 ml de urină se adaugă 3-4 picături dintr-o soluție de acid acetic 10% și 2 ml dintr-o soluție saturată de clorură de sodiu, se încălzește cu grijă într-o baie de apă, crescând treptat temperatura. Dacă în urină există proteine ​​Bence Jones, atunci la o temperatură de 45-60 ° C apare o turbiditate difuză sau se formează un precipitat alb dens. La încălzirea în continuare până la fierbere, precipitatul se dizolvă și la răcire reapare. Acest test nu este suficient de sensibil și trebuie testat prin electroforeză și imunoelectroforeză.

Multe boli apar fără a fi pronunțate manifestari clinice prin urmare, determinarea proteinei în urină în scopul detectării și tratamentului în timp util stare patologică este punct important pentru medicina practică.

Proteina din urină poate fi determinată prin metode calitative și cantitative.

Metode calitative

În prezent, sunt cunoscute aproximativ 100 de reacții calitative la proteine. Ele implică precipitarea proteinelor prin acțiune fizică sau chimică. Cu o reacție pozitivă, apare tulbureala.

Cele mai informative teste sunt:

1. Cu acid sulfosalicilic. Este considerată cea mai sensibilă și cu ajutorul lui este posibil să se determine chiar și cele mai mici cantități de corpi proteici din urină. Descrierea rezultatului cu o urmă de prezență de proteine ​​este desemnată prin termenul „opalescență”, iar cu o cantitate mai mare - „slab pozitiv”, „pozitiv” și cu o pierdere mare de proteine ​​în urină - „reacție puternic pozitivă” .
2. Cu un înlocuitor de acid - aseptol. O soluție a substanței este adăugată în urină, iar când se formează un inel la limita soluțiilor, se spune că proba este pozitivă.
3. Geller. Produs folosind o soluție de acid azotic. Rezultatul procedurii este interpretat similar cu cel cu Aseptol. Uneori, un inel poate fi prezent atunci când uratii sunt prezenți în lichidul de testare.
4. Cu acid acetic cu adaos de dioxid de sulf de potasiu. Dacă concentrația de urină este mare la efectuarea unui astfel de test, aceasta este diluată, altfel poate rezulta un rezultat fals pozitiv, deoarece reacția va fi la urati și acid uric.

Efectuarea incorectă a unui astfel de test poate da adesea un rezultat incorect la nou-născuți, deoarece urina lor este formată cu un conținut ridicat de acid uric.

Regulile de bază la efectuarea testelor sunt următoarele: este necesar ca urina testată să fie transparentă și să aibă un mediu ușor acid (pentru aceasta, uneori se adaugă o cantitate mică de acid acetic), ar trebui să existe două eprubete pentru control.

cuantificarea

Când se efectuează un test de urină, proteina totală este de asemenea determinată prin metode cantitative. Există destul de multe dintre ele, dar cele mai frecvent utilizate sunt următoarele:

1. metoda Esbach. Folosit din secolul al XIX-lea. Pentru a face acest lucru, urina și reactivul sunt turnate într-o anumită eprubetă. Apoi amestecul se agită puțin și se lasă acoperit 24-48 de ore. Precipitatul rezultat se numără prin diviziune pe eprubetă. Concluzia corectă poate fi trasă numai cu urina acidă. Această tehnică este destul de simplă, dar nu are o precizie ridicată și necesită timp.
2. Metoda Brandberg-Stolnikov. Pe baza testului Heller, care vă permite să obțineți un rezultat cu o concentrație de proteine ​​mai mare de 3,3 mg%. Ulterior, această metodă a fost modificată și simplificată.
3. Metodele nefelometrice pentru determinarea cantității de proteine ​​sunt utilizate pe scară largă.

Pentru a înțelege pe deplin cantitatea de proteine, cel mai bine este să utilizați un test de urină pentru proteinele zilnice.

Pentru rezultat corect prima porție de dimineață este turnată, colectarea începe cu a doua porție într-un recipient, care se recomandă păstrarea la frigider.

Ultima porție se colectează dimineața. După aceasta, trebuie să măsurați volumul, apoi să amestecați bine și să turnați o porție de cel mult 50 ml într-un borcan. Acest recipient trebuie depus la laborator. Un formular special necesită să indicați rezultatele volumului total de urină zilnică, precum și înălțimea și greutatea pacientului.

Utilizarea benzilor de testare

Testul pentru proteine ​​în urină funcționează pe principiul indicatorilor. Benzile speciale își pot schimba culoarea în funcție de concentrația de proteine. Sunt convenabile pentru determinarea modificărilor care apar în momente diferite și sunt utilizate atât acasă, cât și în orice instituție medicală și preventivă.

Se folosesc benzile de testare pentru urină după cum este necesar definiție timpurieși urmărirea rezultatelor tratamentului pentru patologiile genito-urinale. Această tehnică de diagnosticare este sensibilă și reacționează la albumină la o concentrație de 0,1 g/l și vă permite să determinați modificări calitative și semi-cantitative ale conținutului de proteine ​​din urină.

Pe baza rezultatelor acestui diagnostic, puteți monitoriza eficacitatea terapiei, puteți face modificări la aceasta și puteți prescrie dieta necesară.

Conținut [Afișare]

O persoană sănătoasă excretă 1,0-1,5 litri de urină pe zi. Conținutul de proteine ​​este de 8-10 mg/dl - fenomen fiziologic. Norma zilnică de proteine ​​în urină este de 100-150 mg și nu ar trebui să ridice suspiciuni. Globulina, mucoproteina și albumina sunt cele care alcătuiesc proteina totală din urină. Un flux mare de albumină indică o încălcare a procesului de filtrare în rinichi și se numește proteinurie sau albuminurie.

Fiecărei substanțe din urină i se atribuie o normă „sănătoasă”, iar dacă nivelul de proteine ​​fluctuează, acest lucru poate indica o patologie renală.

Un test general de urină implică utilizarea fie a primei porții (dimineața) fie prelevarea unei probe zilnice. Acesta din urmă este de preferat pentru aprecierea nivelului de proteinurie, deoarece conținutul de proteine ​​are fluctuații zilnice pronunțate. Urina este colectată într-un singur recipient în timpul zilei și se măsoară volumul total. Pentru un laborator care testează urina pentru proteine, nu este suficientă o probă standard (50 până la 100 ml) din acest recipient; Pentru a obține informații suplimentare, se efectuează suplimentar un test Zimnitsky, care arată dacă nivelul de urină pe zi este normal.

Reveniți la cuprins

Proteinele din urină în mod normal la un adult nu trebuie să depășească 0,033 g/l. În acest caz, norma zilnică nu este mai mare de 0,05 g/l. Pentru femeile însărcinate, norma de proteine ​​în urina zilnică este mai mare - 0,3 g/l, iar în urina de dimineață la fel - 0,033 g/l. Normele proteice diferă la un test general de urină și la copii: 0,036 g/l pentru porția de dimineață și 0,06 g/l pe zi. Cel mai adesea în laboratoare, analiza se efectuează folosind două metode, care arată cât de multă fracție proteică este conținută în urină. Valorile normale de mai sus sunt valabile pentru analizele efectuate cu acid sulfosalicilic. Dacă ați folosit colorant roșu pirogalol, valorile vor diferi de trei ori.

Reveniți la cuprins

• filtrarea în glomeruli renali are loc în mod greșit;
• absorbția proteinelor în tubuli este afectată;
• Unele boli pun o povară grea rinichilor - atunci când proteinele din sânge sunt crescute, rinichii pur și simplu „nu au timp” să le filtreze.

Alte cauze sunt considerate non-renale. Așa se dezvoltă albuminuria funcțională. Proteina apare într-un test de urină când reactii alergice, epilepsie, insuficiență cardiacă, leucemie, otrăvire, mielom, chimioterapie, boli sistemice. Cel mai adesea, acest indicator în testele pacientului va fi primul semn de hipertensiune arterială.

O creștere a proteinelor în urină se poate datora unor factori nepatologici, deci vor fi necesare teste suplimentare

Metodele cantitative pentru determinarea proteinei în urină dau erori, de aceea se recomandă efectuarea mai multor teste și apoi utilizarea unei formule pentru a calcula valoarea corectă. Conținutul de proteine ​​din urină se măsoară în g/l sau mg/l. Acești indicatori proteici fac posibilă determinarea nivelului de proteinurie, sugerarea cauzei, evaluarea prognosticului și deciderea unei strategii.

Reveniți la cuprins

Pentru ca organismul să funcționeze corect, este necesar un schimb constant între sânge și țesuturi. Este posibil doar dacă există o anumită presiune osmotică în vasele de sânge. Proteinele din plasmă sanguină mențin un astfel de nivel de presiune atunci când substanțele cu molecularitate scăzută se deplasează cu ușurință dintr-un mediu cu o concentrație mare într-un mediu cu una mai mică. Pierderea moleculelor de proteine ​​duce la eliberarea sângelui din canalul său în țesut, care este plin de umflături severe. Așa se manifestă proteinuria moderată și severă.

Stadiile inițiale ale albuminuriei sunt asimptomatice. Pacientul acordă atenție numai manifestărilor bolii de bază, care este cauza apariției proteinelor în urină.

Urme de proteinurie reprezintă o creștere a nivelului de proteine ​​din urină datorită consumului de anumite alimente

Urina pentru analiză este colectată într-un recipient curat, fără grăsimi. Înainte de colectare, se arată toaleta perineală, trebuie să vă spălați cu săpun. Femeile sunt sfătuite să acopere vaginul cu o bucată de vată sau un tampon, astfel încât scurgerile vaginale să nu afecteze rezultatul. Este mai bine să nu beți alcool cu ​​o zi înainte, apă minerală, cafea, picant, sărat și alimente care dă culoarea urinei (afine, sfeclă). Activitate fizică puternică, mers lung, stres, temperatură ridicată iar transpirația, consumul excesiv de alimente proteice sau medicamente înainte de a dona urină provoacă apariția proteinelor în analiza urinei unei persoane complet sănătoase. Acest fenomen acceptabil se numește urme de proteinurie.

Reveniți la cuprins

Boli de rinichi care duc la pierderea proteinelor:

• amiloidoza. Celulele normale din rinichi sunt înlocuite cu amiloizi (un complex proteină-zaharidă), care împiedică funcționarea normală a organului. În stadiul proteinuric, amiloizii se depun în țesuturile renale, distrugând nefronul și, drept consecință, filtrul renal. Acesta este modul în care proteinele trec din sânge în urină. Această etapă poate dura mai mult de 10 ani.
• Nefropatie diabetica. Din cauza metabolismului necorespunzător al carbohidraților și lipidelor, are loc distrugerea vaselor de sânge, a glomerulilor și a tubilor din rinichi. Proteinele din urină sunt primul semn al unei complicații prezise a diabetului.
• Boli de origine inflamatorie - nefrita. Cel mai adesea, leziunile afectează vasele de sânge, glomeruli și sistemele pieloliceale, perturbând cursul normal al sistemului de filtrare.
• Glomerulonefrita în cele mai multe cazuri este de natură autoimună. Pacientul se plânge de scăderea cantității de urină, dureri de spate și creșterea tensiunii arteriale. Pentru tratarea glomerulonefritei, se recomandă dieta, regimul și terapia medicamentoasă.
• Pielonefrita. În perioada acută apare cu simptome infectie cu bacterii: frisoane, greață, cefalee. Aceasta este o boală infecțioasă.
• Boala de rinichi cu chisturi multiple.

ÎN corp sanatos moleculele de proteine ​​(și au dimensiuni destul de mari) nu sunt capabile să treacă prin sistemul de filtrare al rinichilor. Prin urmare, nu ar trebui să existe proteine ​​în urină. Această cifră este aceeași atât pentru bărbați, cât și pentru femei. Dacă analiza indică proteinurie, este important să consultați un medic pentru a afla motivele. Specialistul va evalua cât de ridicat este nivelul de proteine, dacă există vreo patologie concomitentă și cum să restabiliți funcționarea normală a organismului. Potrivit statisticilor, femeile au un risc mai mare de boli ale sistemului genito-urinar decât bărbații.

Principiul metodei se bazează pe coagularea proteinelor în urină în prezența acidului azotic (sau soluție de acid sulfosalicilic 20%).

Progres: adăugați 1-2 picături de acid azotic (sau sulfosalicilic) la 5 picături de urină. Când există proteine ​​în urină, apare tulbureala.

Masa. Detectarea componentelor patologice ale urinei .

Notă: dacă în urina testată sunt prezente glucoză și proteine, se determină conținutul lor cantitativ.

Principiul metodei : când proteina interacționează cu roșu pirogalol și molibdatul de sodiu, se formează un complex colorat, a cărui intensitate a culorii este proporțională cu concentrația de proteine ​​din probă.

Reactivi: Reactiv de lucru – soluție de roșu pirogalol în tampon succinat, soluție de calibrare a proteinelor cu o concentrație de 0,50 g/l

Progres:

Se amestecă probele și se lasă timp de 10 minute. la temperatura camerei (18 -25ºС). Se măsoară densitatea optică a probei de testat (Dop) și a probei de calibrare (Dk) față de proba de control la λ=598 (578-610) nm. Culoarea este stabilă timp de 1 oră.

Calcul: concentrația de proteine ​​în urină (C) g/l se calculează folosind formula:

C= Dop/Dk×0,50

unde: Dop = Dk= C = g/l.

Valori normale: până la 0,094 g/l, (0,141 g/zi)

Concluzie:

Principiul metodei : Când D-glucoza este oxidată de oxigenul atmosferic sub acțiunea glucozooxidazei, se formează o cantitate echimolară de peroxid de hidrogen. Sub acțiunea peroxidazei, peroxidul de hidrogen oxidează substraturile cromogene (un amestec de fenol și 4 aminoantipirină - 4AAP) pentru a forma un produs colorat. Intensitatea culorii este proporțională cu conținutul de glucoză.

glucoza oxidaza

Glucoză + O2 + H2O gluconolactonă + H2O2

peroxidaza

2H2O2 + fenol + compus colorat 4AAP + 4H2O

Progres: adăugați 1 ml de soluție de lucru și 0,5 ml de tampon fosfat în două eprubete. Adăugați 0,02 ml de urină în prima eprubetă și 0,02 ml de calibrator (calibrare, soluție standard de glucoză, 10 mmol/l) în a doua. Probele sunt amestecate, ținute timp de 15 minute la o temperatură de 370C într-un termostat, iar densitatea optică a probelor de test (Dop) și de calibrare (Dk) față de reactivul de lucru este măsurată la o lungime de undă de 500-546 nm.

Calcul: C = Dop/Dk  10 mmol/l Dop = Dk =

Concluzie:

Notă. Dacă conținutul de zahăr din urină este mai mare de 1%, acesta trebuie diluat.

În prezent, laboratoarele biochimice folosesc o metodă expres unificată pentru analiza urinei pentru glucoză folosind hârtie reactivă pentru glucoză Glucotest sau folosind benzi de testare combinate pentru pH, proteine, glucoză, corpi cetonici și sânge. Benzile de testare sunt scufundate într-un recipient cu urină timp de 1 secundă. și comparați culoarea pe o scară.

Determinarea proteinelor folosind indicatorul roșu pirogalol

Principiul metodei se bazează pe măsurarea fotometrică a densității optice a unei soluții dintr-un complex colorat format prin interacțiunea moleculelor de proteine ​​cu molecule de colorant complex Pyrogallol Red-Molibdat într-un mediu acid. Intensitatea culorii soluției este proporțională cu conținutul de proteine ​​din materialul studiat. Prezența detergenților în reactiv asigură determinarea echivalentă a proteinelor de natură și structură diferită.

Reactivi. 1) 1,5 mmol/l soluție de roșu pirogalol (PGR): 60 mg PRG se dizolvă în 100 ml metanol. A se păstra la o temperatură de 0-5 °C; 2) 50 mmol/l soluție tampon succinat pH 2,5: 5,9 g acid succinic(HOOC–CH2–CH2–COOH); 0,14 g de oxalat de sodiu (Na2C2O4) și 0,5 g de benzoat de sodiu (C6H5COONa) se dizolvă în 900 ml apă distilată; 3) 10 mmol/l soluție de molibdat de sodiu hidrat cristalin (Na2MoO4 × 2H2O): 240 mg de molibdat de sodiu se dizolvă în 100 ml apă distilată; 4) Reactiv de lucru: adăugați 40 ml de soluție de PGA și 4 ml de soluție de molibdat de sodiu la 900 ml de soluție tampon de succinat. pH-ul soluției este ajustat la 2,5 folosind soluție de acid clorhidric (HCI) 0,1 mol/L și volumul acesteia este ajustat la 1 L. Reactivul în această formă este gata de utilizare și este stabil atunci când este depozitat într-un loc ferit de lumină și la o temperatură de 2–25 ° C timp de 6 luni; 5) 0,5 g/l soluție standard de albumină.

Progresul hotărârii. Adăugați 0,05 ml de urină de testare în prima eprubetă, 0,05 ml de soluție standard de albumină în a doua eprubetă și 0,05 ml de apă distilată în a treia eprubetă (proba de control), apoi se adaugă 3 ml de reactiv de lucru la aceste eprubete. Conținutul tuburilor este amestecat și după 10 minute proba și standardul sunt fotometrate față de o probă de control la o lungime de undă de 596 nm într-o cuvă cu o lungime a căii optice de 10 mm.

Calculul concentrației de proteine ​​din proba de urină de testat se efectuează folosind formula:

unde C este concentrația de proteine ​​din proba de urină de testat, g/l; Apr și Ast - stingerea probei de urină testată și a soluției standard de albumină, g/l; 0,5 - concentrația soluției standard de albumină, g/l.

Note:

• culoarea soluției (complex de culoare) este stabilă timp de o oră;
• relația direct proporțională dintre concentrația de proteine ​​din proba de testat și absorbția soluției depinde de tipul de fotometru;
• dacă conținutul de proteine ​​în urină este peste 3 g/l, proba se diluează cu soluție izotonică de clorură de sodiu (9 g/l) și se repetă determinarea. Gradul de diluție este luat în considerare la determinarea concentrației de proteine.

Vezi si:

• Determinarea proteinelor în urină
• Test unificat cu acid sulfosalicilic
• Metoda unificată Brandberg–Roberts–Stolnikov
• Determinarea cantității de proteine ​​din urină prin reacția cu acidul sulfosalicilic
• Metoda biuretului
• Detectarea proteinei Bence-Jones în urină

Proteinuria este un fenomen în care proteinele sunt detectate în urină, ceea ce indică posibilitatea de afectare a rinichilor și servește ca factor în dezvoltarea bolilor inimii, vaselor de sânge și limfatice.

Detectarea proteinelor în urină nu indică întotdeauna o boală. Acest fenomen este tipic chiar și pentru persoanele absolut sănătoase, în a căror urină pot fi detectate proteine. Hipotermia, activitatea fizică și consumul de alimente proteice duc la apariția proteinelor în urină, care dispar fără niciun tratament.

În timpul screening-ului, proteinele sunt detectate la 17% dintre persoanele aparent sănătoase, dar doar 2% din acest număr de persoane au un rezultat pozitiv al testului ca semn de boală de rinichi.

Moleculele de proteine ​​nu trebuie să intre în sânge. Ele sunt vitale necesare pentru organism - sunt materiale de construcție pentru celule și participă la reacții ca coenzime, hormoni și anticorpi. Atât pentru bărbați, cât și pentru femei, norma este absența completă a proteinelor în urină.

Funcția de a împiedica organismul să piardă moleculele de proteine ​​este îndeplinită de rinichi.

Există două sisteme de rinichi care filtrează urina:

1. glomeruli renali - nu permit trecerea moleculelor mari, dar nu rețin albumina, globulinele - o fracțiune mică de molecule de proteine;
2. tubii renali - adsorb proteinele filtrate de glomeruli si le returneaza in sistemul circulator.

Albumina (aproximativ 49%), mucoproteinele, globulinele se găsesc în urină, dintre care imunoglobulinele reprezintă aproximativ 20%.

Globulinele sunt proteine ​​din zer cu greutate moleculară mare care sunt produse în sistemul imunitar și în ficat. Cele mai multe dintre ele sunt sintetizate sistem imunitar, se referă la imunoglobuline sau anticorpi.

Albumina este o fracțiune de proteine ​​care apare pentru prima dată în urină chiar și cu leziuni renale minore. O anumită cantitate de albumină este prezentă și în urina sănătoasă, dar este atât de nesemnificativă încât nu este detectată prin diagnosticul de laborator.

Pragul inferior care poate fi detectat cu ajutorul diagnosticelor de laborator este de 0,033 g/l. Dacă se pierd mai mult de 150 mg de proteine ​​pe zi, atunci se vorbește despre proteinurie.

Informații de bază despre proteinele din urină

Boala cu proteinurie ușoară este asimptomatică. Din punct de vedere vizual, urina care nu conține proteine ​​nu poate fi distinsă de urina, care conține o cantitate mică de proteine. Urina devine oarecum spumoasă când grad înalt proteinurie.

Excreția activă a proteinelor în urină poate fi presupusă de aspect pacientul numai cu un grad moderat sau sever al bolii din cauza apariției de umflare a membrelor, feței și abdomenului.

Pe primele etape boli semne indirecte Simptomele proteinuriei pot include:

• modificări ale culorii urinei;
• slăbiciune crescândă;
• lipsa poftei de mâncare;
• greață, vărsături;
• dureri osoase;
• somnolență, amețeli;
• temperatură ridicată.

Apariția unor astfel de semne nu poate fi ignorată, mai ales în timpul sarcinii. Acest lucru poate însemna o ușoară abatere de la normă sau poate fi un simptom al dezvoltării gestozei, preeclampsiei.

Cuantificarea pierderii de proteine ​​nu este o sarcină ușoară sunt utilizate mai multe teste de laborator pentru a obține o imagine mai completă a stării pacientului.

Dificultățile în alegerea unei metode pentru detectarea excesului de proteine ​​în urină sunt explicate prin:

• concentrație scăzută de proteine, care necesită instrumente de înaltă precizie pentru a recunoaște;
• compoziția urinei, ceea ce complică sarcina, deoarece conține substanțe care distorsionează rezultatul.

Cele mai multe informații pot fi obținute prin analiza primei porțiuni de urină de dimineață, care este colectată după trezire.

În ajunul analizei, trebuie îndeplinite următoarele condiții:

• nu consumați alimente picante, prăjite, proteice, alcool;
• Evitați să luați diuretice cu 48 de ore înainte;
• limitarea activității fizice;
• respectați cu atenție regulile de igienă personală.

Urina de dimineață este cea mai informativă, deoarece rămâne mult timp în vezică și este mai puțin dependentă de aportul alimentar.

Puteți analiza cantitatea de proteine ​​​​din urină folosind o porție aleatorie, care este luată în orice moment, dar o astfel de analiză este mai puțin informativă și probabilitatea de eroare este mai mare.

Pentru a cuantifica pierderile zilnice de proteine, se efectuează o analiză a urinei totale zilnice. Pentru a face acest lucru, în 24 de ore sunt colectate într-o specială Recipient de plastic toată urina este excretată într-o zi. Puteți începe să colectați oricând. Condiția principală este exact o zi de colectare.

Definiția calitativă a proteinuriei se bazează pe capacitatea proteinei de a se denatura sub influența factorilor fizici sau chimici. Metodele calitative sunt metode de screening care permit determinarea prezenței proteinelor în urină, dar nu fac posibilă evaluarea cu precizie a gradului de proteinurie.

Probele utilizate:

• cu fierbere;
• acid sulfosalicilic;
• acid azotic, reactiv Larionova cu test inel Heller.

Se efectuează un test cu acid sulfosalicilic prin compararea unei probe de urină martor cu una experimentală, în care se adaugă în urină 7-8 picături de acid sulfosalicilic 20%. Prezența proteinei este dedusă din intensitatea turbidității opalescente care apare în eprubetă în timpul reacției.

Testul Heller folosind acid azotic 50% este mai des folosit. Sensibilitatea metodei este de 0,033 g/l. La această concentrație de proteine, un inel sub formă de fir apare într-o eprubetă cu o probă de urină și reactiv la 2-3 minute după începerea experimentului alb, a cărei formare indică prezența proteinei.

Testul lui Heller

Metodele semi-cantitative includ:

• metodă pentru determinarea proteinelor în urină cu ajutorul benzilor de testare;
• Metoda Brandberg-Roberts-Stolnikov.

Metoda de determinare Brandberg-Roberts-Stolnikov se bazează pe metoda inelului Heller, dar permite o evaluare mai precisă a cantității de proteine. La efectuarea unui test folosind această metodă, se folosesc mai multe diluții de urină pentru a obține aspectul unui inel proteic sub formă de fir într-un interval de timp cuprins între 2-3 minute de la începutul testării.

În practică, metoda benzilor de testare este utilizată cu colorant albastru de bromofenol aplicat ca indicator. Dezavantajul testelor este sensibilitatea lor selectivă la albumină, ceea ce duce la rezultate distorsionate dacă crește concentrația de globuline sau alte proteine ​​în urină.

Dezavantajele metodei includ și sensibilitatea relativ scăzută a testului la proteine. Benzile de testare încep să reacționeze la prezența proteinelor în urină atunci când concentrația de proteine ​​depășește 0,15 g/l.

Metodele de evaluare cantitativă pot fi împărțite în:

1. turbidimetric;
2. colorimetric.

Metodele se bazează pe proprietatea proteinelor de a reduce solubilitatea sub influența unui agent de legare pentru a forma un compus slab solubil.

Agenții care provoacă legarea proteinelor pot fi:

• acid sulfosalicilic;
• acid tricloracetic;
• clorură de benzetoniu.

Despre rezultatele testului se trag concluzii pe baza gradului de atenuare a fluxului luminos din proba cu suspensia comparativ cu controlul. Rezultatele acestei metode nu pot fi întotdeauna considerate fiabile din cauza diferențelor în condițiile de funcționare: viteza de amestecare a reactivilor, temperatura și aciditatea mediului.

Luarea medicamentelor cu o zi înainte afectează evaluarea înainte de a efectua teste folosind aceste metode, nu trebuie să luați:

• antibiotice;
• sulfonamide;
• medicamente care conțin iod.

Metoda este accesibilă, ceea ce îi permite să fie utilizat pe scară largă pentru screening. Dar rezultate mai precise pot fi obținute folosind tehnici colorimetrice mai scumpe.

Metodele sensibile care permit determinarea precisă a concentrației proteinelor în urină includ tehnici colorimetrice.

Acest lucru se poate face cu mare precizie:

• reacția biuretului;
• tehnica Lowry;
• tehnici de colorare care folosesc coloranți care formează complexe cu proteinele din urină care diferă vizual de probă.

Metode colorimetrice pentru detectarea proteinelor în urină

Metoda este fiabilă și foarte sensibilă, permițând determinarea albuminei, globulinelor și paraproteinelor în urină. Este folosit ca principală modalitate de a clarifica rezultatele controversate ale testelor, precum și proteinele zilnice din urina pacienților din secțiile de nefrologie ale spitalelor.

Rezultate și mai precise pot fi obținute prin metoda Lowry, care se bazează pe reacția biuretului, precum și reacția Folin, care recunoaște triptofanul și tirozina în moleculele proteice.

Pentru a elimina eventualele erori, proba de urină este purificată din aminoacizi și acid uric folosind dializă. Sunt posibile erori atunci când se consumă salicilați, tetracicline și clorpromazină.

Cea mai precisă modalitate de a determina o proteină se bazează pe capacitatea acesteia de a se lega de coloranți, dintre care se folosesc următoarele:

• Ponceau;
• Coomassie albastru strălucitor;
• roșu pirogalic.

Cantitatea de proteine ​​excretată în urină variază pe parcursul zilei. Pentru a evalua mai obiectiv pierderea de proteine ​​în urină, este introdus conceptul de proteine ​​zilnice în urină. Această valoare este măsurată în g/zi.

Pentru a evalua rapid proteinele zilnice din urină, cantitatea de proteine ​​​​și creatinina este determinată într-o singură porție de urină, apoi pe baza raportului proteină/creatinină, se trage o concluzie despre pierderea de proteine ​​pe zi.

Metoda se bazează pe faptul că rata de excreție a creatininei în urină este o valoare constantă și nu se modifică în timpul zilei. La o persoană sănătoasă, raportul normal proteină:creatinină în urină este de 0,2.

Această metodă elimină posibile greșeli, care poate apărea în timpul colectării zilnice a urinei.

Este mai probabil ca testele calitative să producă rezultate fals pozitive sau fals negative decât testele cantitative. Apar erori în legătură cu administrarea de medicamente, obiceiurile alimentare și activitatea fizică în ajunul testului.

Interpretarea acestui test calitativ este dată de evaluarea vizuală a turbidității în eprubetă în comparație a rezultatului testului cu controlul:

1. o reacție slab pozitivă este evaluată ca +;
2. pozitiv ++;
3. puternic pozitiv +++.

Testul inel Heller evaluează mai precis prezența proteinelor în urină, dar nu cuantifică proteina în urină. La fel ca testul cu acid sulfosalicilic, testul Heller oferă doar o idee aproximativă a conținutului de proteine ​​din urină.

Metoda vă permite să evaluați gradul de proteinurie cantitativ, dar este prea laborioasă și inexactă, deoarece cu o diluare puternică acuratețea evaluării scade.

Pentru a calcula proteinele, trebuie să înmulțiți gradul de diluare a urinei cu 0,033 g/l:

Nu este necesar niciun test conditii speciale, această procedură este ușor de făcut acasă. Pentru a face acest lucru, scufundați banda de testare în urină timp de 2 minute.

Rezultatele vor fi exprimate prin numărul de plusuri de pe bandă, a căror decodare este conținută în tabel:

1. Rezultatele testelor corespunzătoare unei valori de până la 30 mg/100 ml corespund proteinuriei fiziologice.
2. Valorile benzilor de testare de 1+ și 2++ indică proteinurie semnificativă.
3. Valorile de 3+++, 4++++ sunt observate cu proteinurie patologică cauzată de boli renale.

Bandelele de testare pot determina doar aproximativ creșterea proteinelor în urină. Ele nu sunt folosite pentru un diagnostic precis și, cu atât mai mult, nu pot spune ce înseamnă.

Bandelele de testare nu permit evaluarea adecvată a cantității de proteine ​​din urina femeilor însărcinate. O metodă mai fiabilă de evaluare este determinarea proteinelor în urina zilnică.

Determinarea proteinelor în urină cu ajutorul unei benzi de testare:

Proteinele zilnice din urină servesc ca o evaluare diagnostică mai precisă a stării funcționale a rinichilor. Pentru a face acest lucru, este necesar să colectați toată urina excretată de rinichi pe zi.

Valorile acceptabile pentru raportul proteină/creatinină sunt datele prezentate în tabel:

Dacă pierdeți mai mult de 3,5 g de proteine ​​pe zi, afecțiunea se numește proteinurie masivă.

Dacă există multe proteine ​​în urină, este necesară o reexaminare după 1 lună, apoi după 3 luni, pe baza rezultatelor cărora se stabilește de ce se depășește norma.

Motive proteine ​​crescuteîn urină este creșterea producției sale în organism și perturbarea rinichilor, se distinge proteinuria:

• fiziologic – abaterile minore de la normă sunt cauzate de procese fiziologice și se rezolvă spontan;
• patologice - modificările sunt cauzate ca urmare a unui proces patologic în rinichi sau alte organe ale corpului fără tratament;

O ușoară creștere a proteinelor poate fi observată cu o nutriție abundentă de proteine, arsuri mecanice, leziuni, însoțite de creșterea producției de imunoglobuline.

Proteinuria ușoară poate fi cauzată de activitate fizică, stres psiho-emoțional și administrarea anumitor medicamente.

Proteinuria fiziologică se referă la o creștere a proteinelor în urina copiilor în primele zile după naștere. Dar, după o săptămână de viață, conținutul de proteine ​​din urina copilului este considerat o abatere de la normă și indică o patologie în curs de dezvoltare.

Boli de rinichi, boli infecțioase sunt, de asemenea, uneori însoțite de apariția proteinelor în urină.

Astfel de afecțiuni corespund de obicei unui grad ușor de proteinurie, sunt fenomene tranzitorii, se rezolvă rapid de la sine, fără a necesita un tratament special.

Condiții mai severe, proteinurie severă se observă în cazul:

• glomerulonefrită;
• Diabet;
• boala de inima;
• cancerul vezicii urinare;
• mielom multiplu;
• infecții, afectarea medicamentelor, boală polichistică a rinichilor;
• tensiune arterială crescută;
• lupus eritematos sistemic;
• sindromul Goodpasture.

Obstrucția intestinală, insuficiența cardiacă și hipertiroidismul pot cauza urme de proteine ​​în urină.

Tipurile de proteinurie sunt clasificate în mai multe moduri. Pentru o evaluare calitativă a proteinelor, puteți utiliza clasificarea Yaroshevsky.

Conform taxonomiei lui Yaroshevsky, creată în 1971, proteinuria se distinge:

1. renală - care include filtrarea glomerulară afectată, eliberarea de proteine ​​​​tubulare, insuficiența resorbției proteinelor în tubuli;
2. prerenal – are loc în afara rinichilor, eliminarea din organism a hemoglobinei, proteine ​​care apar în exces în sânge ca urmare a mielomului multiplu;
3. postrenal - apare în zona tractului urinar după rinichi, excreția de proteine ​​din cauza distrugerii organelor urinare.

Pentru a cuantifica ceea ce se întâmplă, gradele de proteinurie se disting în mod convențional. Trebuie amintit că pot deveni cu ușurință mai severe fără tratament.

Cel mai sever stadiu al proteinuriei se dezvoltă cu o pierdere de peste 3 g de proteine ​​pe zi. Pierderea de proteine ​​de la 30 mg până la 300 mg pe zi corespunde stadiului moderat sau microalbumnuriei. Până la 30 mg de proteine ​​în urină zilnică înseamnă proteinurie ușoară.

Cât este cantitatea normală de proteine ​​în urină?

1. În mod normal, practic nu există proteine ​​în urină (mai puțin de 0,002 g/l). Cu toate acestea, în anumite condiții, în urină pot apărea cantități mici de proteine indivizi sanatosi dupa ce a luat cantitate mare alimente proteice, ca urmare a răcirii, în timpul stresului emoțional, a activității fizice prelungite (așa-numita proteinurie de marș).

   Apariția unei cantități semnificative de proteine ​​în urină (proteinurie) este o patologie. Proteinuria poate fi cauzată de afecțiuni renale (glomerulonefrită acută și cronică, pielonefrită, nefropatie de sarcină etc.) sau boli ale tractului urinar (inflamația vezicii urinare, a prostatei, a ureterelor). Proteinuria renală poate fi organică (glomerulară, tubulară și în exces) și funcțională (proteinurie febrilă, ortostatică la adolescenți, cu supraalimentare). sugari, la nou-născuți). Proteinuria funcțională nu este asociată cu patologia renală. Cantitatea zilnică de proteine ​​variază la pacienți de la 0,1 la 3,0 g sau mai mult. Compoziția proteinelor urinare este determinată prin electroforeză. Apariția proteinei Bence Jones în urină este caracteristică mielomului și macroglobulinemiei Waldenström, #223;2 microglobulinei cu afectare a tubilor renali.

2. În mod normal, practic nu există proteine ​​în urină (mai puțin de 0,002 g/l).
3. Principalele semne ale bolii evidențiate prin examinarea urinei.

   Gravitate specifică SG. O scădere a greutății specifice indică o scădere a capacității rinichilor de a concentra urina și de a elimina deșeurile din organism, ceea ce se întâmplă în cazul insuficienței renale. O creștere a greutății specifice este asociată cu o cantitate mare de zahăr și săruri în urină. Trebuie remarcat faptul că pentru a evalua gravitație specifică Nu este posibil să utilizați un singur test de urină, pot exista modificări aleatorii, trebuie să repetați testul de urină de 1-2 ori.

   Proteine ​​​​Proteine ​​în urină - proteinurie. Cauza proteinuriei poate fi afectarea rinichilor înșiși din cauza nefritei, amiloidozei sau leziunilor cauzate de otrăvuri. Proteinele din urină pot apărea și din cauza unor boli ale tractului urinar (pielonefrită, cistita, prostatita).

   Glucoza Glucoza (zahărul) în urină - glucozurie - cel mai adesea cauzată de diabetul zaharat. O cauză mai rară este afectarea tubilor renali. Este foarte alarmant dacă corpii cetonici sunt detectați împreună cu zahărul în urină. Acest lucru se întâmplă cu severe, dereglate diabetul zaharatși este un prevestitor al celei mai severe complicații a diabetului zaharat - coma diabetică.

   Bilirubina, Urobilinogen Bilirubina și urobilina sunt determinate în urină când diferite forme icter.

   Eritrocite Eritrocite în urină – hematurie. Acest lucru se întâmplă fie atunci când rinichii înșiși sunt afectați, cel mai adesea din cauza inflamației lor, fie la pacienții cu boli. tractului urinar. Dacă, de exemplu, o piatră se mișcă de-a lungul lor, poate răni membrana mucoasă și vor exista celule roșii din sânge în urină. O tumoare renală dezintegrată poate duce, de asemenea, la hematurie.

   Leucocite Leucocite în urină - leucociturie, cel mai adesea o consecință a modificărilor inflamatorii ale tractului urinar la pacienții cu pielonefrită, cistită. Leucocitele sunt adesea detectate în timpul inflamației organelor genitale externe feminine, iar la bărbați - în timpul inflamației glandei prostatei.

   Cilindri Cilindrii sunt formațiuni microscopice unice. O persoană sănătoasă poate avea 1-2 gipsuri hialine. Ele se formează în tubulii rinichilor, acestea sunt particule de proteine ​​lipite împreună. Dar o creștere a numărului lor, gipsurile de alte tipuri (granulare, eritrocitare, grase) indică întotdeauna leziuni ale țesutului renal în sine. Sunt cilindri la boli inflamatorii rinichi, leziuni metabolice, de exemplu, diabet.

   Conținutul informațional al metodei și limitele acesteia. Conținutul informațional analiza generala testul de urină pentru identificarea bolilor specifice de rinichi este scăzut, de obicei, sunt necesare studii suplimentare; Dar acest studiu este foarte important, mai ales atunci când se efectuează studii preventive, deoarece ne permite să identificăm semne timpurii boli de rinichi. De asemenea, se știe că bolile de rinichi apar adesea în mod latent și doar un test de urină permite suspectarea lor și efectuarea examinărilor suplimentare necesare.

4. În majoritatea laboratoarelor, atunci când testează urina pentru proteine, se folosesc mai întâi reacții calitative, care nu detectează proteinele în urina unei persoane sănătoase. Dacă proteina din urină este detectată prin reacții calitative, se efectuează determinarea ei cantitativă (sau semi-cantitativă). În acest caz, caracteristicile metodelor utilizate, care acoperă un spectru diferit de uroproteine, sunt importante. Astfel, la determinarea proteinei folosind acid sulfosalicilic 3%, cantitatea de proteină de până la 0,03 g/l este considerată normală, dar atunci când se utilizează metoda pirogalolului, limita valorilor normale ale proteinelor crește la 0,1 g/l. În acest sens, fișa de analiză trebuie să indice valoarea normală a proteinei pentru metoda utilizată de laborator.

   La determinarea cantităților minime de proteine, se recomandă repetarea analizei în cazuri îndoielnice, trebuie determinată pierderea zilnică de proteine ​​în urină. În mod normal, urina zilnică conține proteine cantități mici. În condiții fiziologice, proteina filtrată este aproape complet reabsorbită de epiteliul tubilor proximali și conținutul său în cantitatea zilnică de urină variază, conform diferiților autori, de la urme la 20-50, 80-100 mg și chiar până la 150. -200 mg. Unii autori consideră că excreția zilnică de proteine ​​în cantitate de 30–50 mg/zi este normă fiziologică pentru un adult. Alții consideră că excreția urinară de proteine ​​nu trebuie să depășească 60 mg/m2 de suprafață corporală pe zi, excluzând prima lună de viață, când cantitatea de proteinurie fiziologică poate fi de patru ori mai mare decât valorile indicate.

   Condiția generală pentru apariția proteinelor în urina unei persoane sănătoase este concentrația lor suficient de mare în sânge și o greutate moleculară de cel mult 100-200 kDa.

5. asta nu este norma, cu diagnosticul tau se poate, un alt lucru este ca pentru sindromul nefrotic acesta este de fapt un mic indicator... uita-te la clinica - umflarea, presiunea etc. continua sa iei tratamentul prescris..
6. si totusi voi spune: NU ar trebui sa fie normal!